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phiC31整合酶介导的低密度脂蛋白受体基因治疗对小鼠动脉粥样硬化病变的影响
目的 phiC31整合酶可以介导携带含有attB序列的外源DNA与基因组特定的位点重组,文章分析该phiC31整合酶所介导的外源LDLR表达对家族性高胆固醇血症模型小鼠(LDLR-/-)血脂代谢及动脉粥样硬化病变的影响.方法 雄性小鼠进行高脂饲料喂养诱导病变后,通过尾静脉共注射表达整合酶的pCMV-int和带有attB序列的pcDNA3.1-TBG-LDLR-attB的靶向整合载体,同时设置共注射pCMV-int和非靶向无attB序列pcDNA3.1-TBG-LDLR的LDLR表达载体小鼠作为对照.结果 LDLR在phiC31整合酶的介导下,在小鼠肝细胞系中高效、持久表达;体内检测还发现LDLR在肝脏特异甲状腺结合球蛋白启动子的作用下在肝细胞内特异表达,而且该表达明显改善血脂代谢状况,与非靶向小鼠相比,携带attB靶向整合的LDLR可以使血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)低35％左右,主动脉斑块/管腔总面积比减小了19％.结论 位点特异性整合的LDLR的表达,降低LDLR-/-小鼠血浆胆固醇、改善动脉粥样硬化病变.
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LDLR-/-小鼠中脂代谢相关基因的表达
目的 分析LDLR基因敲除小鼠体内脂代谢相关基因ApoB100、PPARα、LXRα以及ABCA1与野生型相比表达水平的差异情况.方法 应用多重PCR的方法对LDLR-/-小鼠基因型进行鉴定；接着分别对LDLR-/-小鼠和野生型小鼠脂代谢相关基因的mRNA相对丰度以及蛋白表达水平进行qRT-PCR、ELISA分析.结果 与野生型相比,LDLR-/-小鼠中ApoB100、PPARα的mRNA及蛋白表达均上调(P＜0.05)；ABCA1的表达水平下降(P＜0.01),蛋白水平上的下降幅度更为明显；而LXRα不管在mRNA或蛋白水平上均检测不到差异表达.结论 LDLR基因功能的缺失对不同的脂类代谢相关基因的表达产生不同的影响.本研究有助于人们进一步了解家族性高胆固醇血症的发病机制,同时也为药物设计中靶位点的选择提供参考价值.
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实验性小鼠动脉粥样硬化斑块易损指数计算方法的优化
目的 通过对Shiomi等提出的以脂质堆积为核心的斑块易损指数计算方法进行优化,以期更全面、客观地对实验性动脉粥样硬化斑块不稳定性进行评估.方法 实验分为对照组(C57BL/6小鼠)和模型组(LDLR-/-和ApoE-/-小鼠),每组6只动物.对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,25周后处死动物,分离主动脉根部和主动脉弓,经OCT包埋后连续切片,分别进行H&E、苦味酸-天狼猩红、油红O、阿利新蓝染色,内皮细胞及平滑肌细胞免疫荧光染色、基质金属蛋白酶及巨噬细胞免疫组织化学染色.对Shiomi等提出的斑块易损指数公式进行改良,在计算公式分子中增加影响斑块不稳定性因素,同时在分母中增加影响斑块稳定性指标,优化动脉粥样硬化斑块易损指数计算公式.通过对比两个公式对LDLR-/-小鼠主动脉根部和无名动脉斑块稳定性的判断,考察评估优化后计算公式的可靠性.之后采用优化公式对高脂饮食ApoE-/-小鼠和LDLR-/-小鼠主动脉不同部位斑块稳定性进行评价,对比两种小鼠动脉粥样硬化进展的差异.结果 模型组小鼠主动脉不同部位斑块破损面积,脂质沉积,胶原蛋白、蛋白多糖和基质金属蛋白酶分布,巨噬细胞浸润,纤维帽内皮细胞覆盖率和平滑肌细胞覆盖率与对照组相比发生明显改变.在此基础上优化了基于多指标病理染色的斑块不稳定性计算公式.通过计算发现,ApoE-/-小鼠和LDLR-/-小鼠无名动脉斑块易损指数明显大于主动脉根部;而在相同部位,ApoE-/-小鼠斑块易损指数明显高于LDLR-/-小鼠.结论 本研究所优化的基于多指标组织病理学染色的斑块易损指数计算公式,涵盖多种影响斑块不稳定性的重要因素,可对斑块不稳定性进行准确评估.该方法简单、全面、可靠,具有较大实用价值.
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PSGL-1缺失对动脉粥样硬化LDLR-/-鼠巨噬细胞脂质吞噬及代谢组的影响
目的 采用病理学及代谢组学方法研究PSGL-1缺失对巨噬细胞脂质吞噬能力及代谢组的影响.方法 提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,进行油红O染色,采集样本的1 H NMR谱并运用多变量分析方法进行代谢特征的分析.结果 PSGL-1-/-;LDLR-/-小鼠的腹腔巨噬细胞中脂质面积减少;与LDLR-/-鼠比较,PSGL-1-/-;LDLR-/-小鼠巨噬细胞代谢物中牛磺酸和三甲胺的含量上调,而脂质、乳酸、丙氨酸和琥珀酸盐含量降低.结论 PSGL-1缺失影响腹腔巨噬细胞吞噬脂质的功能,而且能够调控LDLR-/-小鼠巨噬细胞的代谢状态.
