您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
Tp92基因文献资料
-
梅毒螺旋体膜蛋白Tp92真核表达重组体的构建及其表达鉴定
目的以梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白基因Tp92为目的基因,构建Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Tp92,并鉴定其在Hela细胞能否正确表达,为进一步开展TpDNA疫苗动物实验打下基础.方法应用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增Tp92基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Tp92,脂质体介导将pcDNA3.1(+)-Tp92转染入Hela细胞,以免疫酶标法和一步法RT-PCR检测pcDNA3.1(+)-Tp92在Hela细胞中的表达情况.结果双酶切及测序鉴定证明成功构建Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Tp92,DNA测序显示重组质粒含有2 103 bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变.测序后结果经与GenBank登录的序列做blast比较,载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Tp92基因序列完全一致,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为95.5%～100%,证实本研究所得到的基因为所需基因,同时也表明该基因为Tp的保守性基因.免疫酶标法结果显示该重组体在Hela细胞能有效表达目的蛋白与梅毒阳性标准血清中相应抗体反应;RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与Tp92基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mRNA.结论Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Tp92的成功构建及在体外真核细胞中的有效表达,为进一步研制梅毒DNA疫苗及其生物学功能的研究奠定了一定的实验基础.
