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输血筛查文献资料
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荧光定量PCR同步检测人类疱疹病毒6,7,8型方法的建立
目的:建立同步检测人类疱疹病毒6,7,8型(HHV-6,-7,-8)的多重荧光定量PCR方法.方法:分别针对HHV-6,-7,-8的U67、U36、ORF65基因设计3对引物和3种Taq Man-LNA探针,构建三重荧光定量PCR反应体系,用于同步扩增HHV-6,-7,-8.分别应用HHV-6,-7,-8质粒建立对应标准曲线,并对多重荧光定量PCR方法进行线性范围、灵敏度、特异性、重复性和扩增效率等方法学评价.以DNA测序法为参考方法,检测45例疑似HHV感染者外周血单个有核细胞(PBMC)中的HHV-6,-7,-8,对多重荧光定量PCR方法进行临床特异性和敏感性评估.结果:多重荧光定量PCR方法检测HHV-6,-7,-8的线性范围均在106-1011 Copies/L,相关系数均＞0.99,灵敏度为8×105 Copies/L,低检测限为5×105 Copies/L,无非特异性扩增,线性范围内HHV-6,-7,-8的批间、批内变异系数(CV)均＜5.5％；与单重荧光定量PCR相比,检测HHV-6,-7,-8质粒含量的相关性分别为0.980,0.987,0.965.以DNA测序方法为金标准,多重荧光定量PCR检测HHV-6,-7,-8的特异性均为100％,灵敏度分别是93.1％、80％、100％.结论:多重荧光定量PCR能够对HHV-6,-7,-8进行同步、快速和准确的定量检测,将在输血安全筛查方面有着广泛的应用前景.
关键词： 人类疱疹病毒 多重荧光定量PCR TaqMan-LNA探针 输血筛查
