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携带人肝细胞生长因子第一结构域基因溶瘤腺病毒的构建及其对胃癌细胞的杀伤作用
目的 构建携带具有抗肿瘤细胞和抗血管生成作用的人肝细胞生长因子第一结构域(HGFK1)基因的肿瘤特异性启动子调控的溶瘤腺病毒,研究其对胃癌细胞选择性杀伤作用.方法以人端粒酶反转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)分别调控溶瘤腺病毒复制必要的E1a和E1b基因,基因组插入HGFK1基因,构建HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-HGFK1-EGFP)和无HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-EGFP),空斑计数法滴定病毒浓度;病毒分为3组:实验A组(TH-Ad-HGFK1-EGFP)、实验B组(TH-Ad-EGFP)和对照C组(Ad-EGFP),分别感染胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞(HF);半数细胞培养物感染量法(TCID50)检测病毒扩增倍数;噻唑蓝(MTT)法检测病毒杀伤抑制作用;双重荧光染色检测病毒促凋亡作用.结果 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP、TH-Ad-EGFP经测序及聚合酶链反应(PCR)鉴定确认构建成功,滴度都为2×1010pfu/ml;病毒扩增结果显示:A、B组病毒在SGC7901细胞中的扩增倍数分别为1.47×104、1.60×104倍,远大于对照C组病毒,在HF细胞中为110倍和124倍,远小于对照C组病毒;MTT结果显示:当感染复数(MOI)=100时,A组病毒对SGC7901细胞72、96h后的抑制率为(71.34±8.27)%、(74.56±1.78)%,B组为(30.58±3.83)%、(31.84±6.62)%,C组为(23.40±2.29)%、(21.18±2.32)%.A组与B组两时间点分别比较差异有统计学意义(P=0.002、P=0.003),A组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.000).A、B组病毒对HF细胞在96h后的抑制率为(18.94±0.88)%、(22.84±3.34)%,C组为(53.25±3.50)%,A、B两组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.001);凋亡结果显示:A组SGC7901细胞的凋亡率为(18.66±4.04)%,远高于其余各组.结论 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP能在胃癌细胞SGC7901中复制增殖并对其有杀伤抑制、促凋亡作用.
关键词： 胃癌 人肝细胞生长因子第一结构域 溶瘤腺病毒 SGC7901
