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TBX18转录因子文献资料
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TBX18腺病毒载体体外诱导乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化
目的 观察TBX18腺病毒载体在体外转染乳鼠心肌细胞,能否诱导其向起搏样细胞分化.方法 胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离培养乳鼠心肌细胞,光学显微镜下观察细胞形态,48 h后用免疫荧光技术检测心肌细胞纯度.将心肌细胞随机分为实验组(TBX18组)、空病毒对照组(GFP组),转染时分别加入带TBX18转录因子和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒,带GFP的腺病毒,采用实时荧光定量聚合酶链式反应,蛋白质免疫印迹和免疫荧光技术检测各组心肌细胞HCN4 mRNA和HCN4蛋白的表达.结果 培养24 h后,心肌细胞几乎完全贴壁,可见梭形、菱形或多边形;48 h后形成网状或放射状细胞簇.α-actin检测心肌细胞纯度高达96％.TBX18组心肌细胞中HCN4 mRNA和HCN4蛋白的表达水平明显高于GFP组(28 943.997±5 019.682 vs 1.000±0.000,n=9,P＜0.05;0.631±0.025 vs 0.192±0.003,n=9,P＜0.05);倒置荧光显微镜下观察TBX18组因表达HCN4蛋白而发出红色荧光,GFP组几乎看不到HCN4蛋白的表达.结论 TBX18腺病毒载体体外转染乳鼠心肌细胞,能使乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化.
