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白细胞介素12干扰RNA文献资料
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携带小鼠白细胞介素-12 siRNA基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达
目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12 siRNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础.方法:将IL-12p35 siRNA和IL-12p40 siRNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD Adeno-XTM体外连接后代共转化大肠杆菌DH5α菌株, 重组腺病毒质粒经过293细胞的包装扩增及氯化铯(CsCl)纯化,生成带有IL-12p35和IL-12p40 siRNA基因的重组腺病毒载体,感染DC细胞.结果:经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性;经测定,病毒滴度为2.5×1010efu/ml.结论:成功构建带有IL-12p35 siRNA 和IL-12p40 siRNA cDNA的重组腺病毒载体,其所携带的载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达,为进一步的研究奠定了基础.
关键词： 白细胞介素12干扰RNA 腺病毒载体 克隆 T4连接酶 树突状细胞
