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改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法
目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系.方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6 min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4 min,用100 μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养.用内皮细胞的重要标记物VIII因子相关抗原鉴定细胞,并通过3H-TdR掺入法观察培养细胞对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的反应性.结果:细胞的获得率为1.2×106细胞/g心肌组织,显微镜观察培养细胞具有内皮细胞生长特性:单层"卵石样"排列特征;VIII因子免疫细胞化学染色呈阳性;证实获得的是内皮细胞.bFGF刺激后3H-TdR掺入率与对照组比较差异显著(P＜0.05).结论:本研究利用改良的酶消化法,缩短了消化时间,提高了细胞获得率,同时培养的内皮细胞对生长因子具有良好反应性,表明该方法是一种比较理想的体外心肌微血管内皮细胞培养体系.
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洛伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱引起的离体血管内皮损伤的保护作用
目的 探讨洛伐他汀(Lov)对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)所致血管内皮损伤的保护作用及机制. 方法 利用家兔离体胸主动脉环和培养的人内皮细胞模型,分别观察洛伐他汀对LPC致离体血管环内皮依赖性舒张反应的损伤及对内皮细胞合成NO的损伤的保护作用.血管环分别与LPC(4 mg·L-1)和洛伐他汀(0.025、0.05、0.1 μmol·L-1)单独孵育和共孵各15 min,分别检测乙酰胆碱(ACh)诱导的内皮依赖性舒张(EDR)反应及硝普钠诱导的非内皮依赖性舒张(EDR)反应及血管组织中的脂质过氧化物产物丙二醛(MDA)的含量.在培养的人内皮细胞和培养基中分别加入LPC和洛伐他汀,分别检测LPC和洛伐他汀对内皮细胞中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(eNOS)的影响.结果 LPC(4 mg·L-1)与血管环孵育15 min, 引起了血管EDR 的显著降低,大舒张比值较对照组明显减小(P＜0.01),洛伐他汀剂量依赖性地减轻了LPC对血管EDR的损伤作用,其大舒张比值较LPC损伤组明显增加,(P＜0.01).LPC和洛伐他汀对硝普钠诱导的非内皮依赖性舒张反应无明显影响.LPC引起了血管组织中MDA浓度明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.01);不同浓度的洛伐他汀与血管环预孵后再与LPC孵育,剂量依赖性地减少了LPC所增加的MDA浓度,与 LPC损伤组比较有显著差异(P＜0.01).LPC 与培养的内皮细胞孵育,导致了内皮细胞NO含量和eNOS活性的降低,不同浓度的洛伐他汀与内皮细胞预孵后再与LPC孵育,剂量依赖性地提高eNOS活性和NO的含量.结论 LPC能直接抑制血管的EDR反应,洛伐他汀能剂量依赖性地拮抗LPC对EDR反应的抑制作用.其机制可能与LPC触发脂质过氧化反应,从而抑制血管内皮细胞NO的合成和增加NO的消耗有关,洛伐他汀通过抗氧化而保护血管内皮细胞的功能.
