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pcDNA3.1(-)/tPA-交联明胶微球复合物体外基因转染的实验研究
目的:检测交联明胶微球结合和缓释pcDNA3.1(-)/tPA的能力及其转染体外培养人脐静脉内皮细胞的瞬时转染效率.方法:采用紫外分光光度法检测交联明胶微球结合pcDNA3.1(-)/tPA的大包封率和体外缓释规律;采用免疫荧光染色法检测pcDNA3.1(-)/tPA 交联明胶微球复合物缓释的pcDNA3.1(-)/tPA转染内皮细胞的瞬时转染效率.结果:交联明胶微球能有效结合pcDNA3.1(-)/tPA,大包封率为62.75±3.31%;且在体外能持续缓释质粒DNA超过4周.pcDNA3.1(-)/tPA 交联明胶微球复合物缓释的pcDNA3.1(-)/tPA能被转移进入人脐静脉内皮细胞中并有效表达,瞬时转染效率为12.74±2.53%.结论:交联明胶微球能良好结合和缓释pcDNA3.1(-)/tPA,并能成功进行体外基因转染.
关键词: 交联明胶 微球 组织型纤溶酶原激活物 基因转染 -
交联明胶材料制备及细胞毒性的实验研究
目的:制备交联明胶,并检测其微球物理性质和细胞毒性.方法:采用双相乳化冷凝聚合法制备交联明胶,采用光镜和扫描电镜观察微球外形和分散度,紫外分光光度法测绘交联明胶体外戊二醛释放曲线,MTT实验检测其细胞毒性.结果:所制备的交联明胶微球表面光滑、直径均匀,干粉微球直径为21.13±1.42 μm,溶胀后为26.72 ±1.74 μm,溶胀率为127%.戊二醛释放实验和MTT实验证明其无细胞毒性.结论:交联明胶微球能在体外缓释超过30天,能有效吸附溶液、细胞毒性低,是下一步以交联明胶为载体进行基因转染实验的基础.