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hSnu114蛋白文献资料
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重组pEGFP-hSnu114质粒的构建及表达
目的 将hSnu114基因定向连入pEGFP质粒GFP的下游,使hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞内融合表达.从而为进一步研究hSnu114蛋白的功能奠定实验基础.方法 本实验已经构建PTZ57R/T –hSnu114和pcDNA3.1(-)-hSnu114重组质粒,想要构建pEGFP-hSnu114重组质粒,需通过引入SalⅠ酶切位点,调整N端起始密码子与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因之间的序列,使其不破坏读码框,融合蛋白正确表达.PCR扩增出hSnu114的第一部份 (SalⅠ～MunⅠ基因序列),从 hSnu114-pcDNA3.1(-)重组质粒回收hSnu114的第二部分(MunⅠ～BamHⅠ片段),定向克隆至T/A载体,构建hSnu114全长(SalⅠ～BamHⅠ)pTZ57R/T重组质粒.采用SalⅠ和BamHⅠ双酶切方法,从重组质粒中获得hSnu114全长,将该基因片段连接入pEGFP质粒.将构建成功的pEGFP-hSnu114质粒,转染入HeLa细胞,荧光显微镜下可观察绿色荧光蛋白表达.进行Western印迹检测.结果 ① hSnu114 SalⅠ～MunⅠ目的片段获取.②将该pEGFP-hSnu114质粒进行双酶切鉴定可见hSnu114全长片段.③转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.④ Western印迹可检测到pEGFP-hSnu114融合蛋白.结论 ① hSnu114全长成功载入pEGFP质粒.② hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞中融合表达.
