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氯吡格雷对人早期内皮祖细胞黏附、迁移及增殖功能的影响
目的 探讨氯吡格雷对人早期内皮祖细胞(EPCs)黏附、迁移及增殖功能的影响.方法 体外培养人外周血早期EPCs并进行鉴定；将含不同浓度(1×10-3～200×10-3 mmol·L-1)氯吡格雷的培养液与EPCs共培养24h,检测黏附、迁移及增殖功能；应用含浓度为20×10-3 mmol·L-1氯吡格雷的培养液与EPCs共培养0.5～72.0 h,检测EPCs上述功能.结果 培养EPCs第4天,早期EPCs呈典型长梭形；培养EPCs第7天数目增多,可摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白以及FITC标记的荆豆凝集素.氯吡格雷可使细胞明显增多；不同浓度的氯吡格雷可改善其黏附(F=56.54,P=0.00)、迁移(F =60.23,P=0.00)和增殖(F=1.45,P=0.16)功能；氯吡格雷浓度为20×10-3 mmol·L-1时,保护作用强；当共培养不同时间后,其仍可改善EPCs黏附(F=127.03,P =0.00)、迁移(F=96.03,P=0.00)和增殖(F=10.46,P=0.00)功能；保护作用呈时间依赖性,但于24h后达到平台期.结论 氯吡格雷可改善人外周血早期EPCs的黏附、迁移及增殖功能,且具有浓度依赖性和时间依赖性.
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兔外周血检测早期内皮祖细胞方法的比较
目的 对内皮祖细胞(EPCs)检测中常用的密度梯度离心法和两种裂解红细胞的方法进行比较,探索对血液中EPCs进行以鉴定数量、含量为目的的简便、经济、准确的实验方法.方法 取新西兰白兔动脉血存储于含肝素的真空采血管中,分别采用淋巴细胞分离液、流式细胞溶血素和红细胞裂解液对血液进行预处理.所获细胞采用抗小鼠藻蓝蛋白(APC)荧光素标记的CD3(CD3-APC)、抗小鼠藻红蛋白(PE)荧光素标记的CD45(CD45-PE)、抗小鼠异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD133 Prominin-1[CD133-(Prominin-1)-FITC]进行标记后通过流式细胞仪检测早期EPCs含量.结果 3种方法检测早期EPCs含量差异无统计学意义(P＞0.05),其中流式细胞溶血素法所需的血液、处理液、试管和仪器少,方法简便,操作中影响实验结果的因素少,有利于重复处理和测试.结论 流式细胞溶血素法是检测外周血EPCs预处理方法中容易实施的一种方法.
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sEHi对颈动脉狭窄患者外周血早期内皮祖细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi) AUDA对颈动脉狭窄(CS)患者外周血来源的早期内皮祖细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用密度梯度离心法,从CS患者外周血获取单个核细胞,培养至7天,收集贴壁细胞,采用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪进行早期内皮祖细胞鉴定.分别用不同浓度(0、0.1、1、10 μmol/L) AUDA干预24 h,采用免疫印迹法观察AUDA处理后其VEGF的表达.取年龄性别匹配的健康体检者的早期内皮祖细胞作为对照组.结果 与对照组相比,CS患者早期内皮祖细胞VEGF表达显著下降;与处理前(0 μmol/L AUDA)相比,AUDA呈剂量依赖性地增强CS患者早期内皮祖细胞VEGF表达.结论 sEHi通过环氧二十碳三烯酸介导上调早期内皮祖细胞VEGF的表达,并呈浓度依赖性,其有望成为一类治疗CS的新型药物.
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外周血两种不同类型内皮祖细胞与颈动脉狭窄的关系
目的 探讨外周血中早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞数量和功能变化与颈动脉狭窄程度之间的关系.方法 入组对象60例,根据全脑血管造影术分成颈动脉狭窄组40例(其中轻度狭窄组20例,中重度狭窄组20例),对照组20例.在全脑血管造影术中抽取患者股动脉血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,分别培养至7天和21天鉴定为早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞,计数细胞集落数量并分别用MTr比色法、改良的Boyden小室法和HFN培养板测定早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞的增值、迁移、黏附功能.结果 颈动脉狭窄组患者吸烟、高血压、甘油三酯、低密度脂蛋白明显高于对照组,高密度脂蛋白低于对照组(P＜0.05)；而年龄、性别、血糖、总胆固醇与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,颈动脉狭窄组外周血早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞数量及功能均下降(P＜0.05),晚期内皮祖细胞数量与功能改变与颈动脉狭窄程度呈负相关(P＜0.05).结论 颈动脉狭窄患者外周血晚期内皮祖细胞数量减少,功能受损,其数量与功能变化与颈动脉狭窄程度呈负相关.对于颈动脉狭窄患者,检测晚期内皮祖细胞数量及功能可间接预测颈动脉狭窄严重程度.
