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Cx50文献资料
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先天性核性白内障家系致病基因的克隆及在真核细胞中的表达
目的 克隆1个先天性核性白内障家系致病基因-突变型GJA8(mGJA8),研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位.方法 从研究发现的先天性核性白内障家系患者基因组中扩增突变型mGJA8,克隆入载体pGEF-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建pEGFP-N1-mGJA8重组表达质粒,然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,后通过脂质体包埋转染法,用pEGFP-N1-mGJA8和pEGFP-N1质粒转染COS-7细胞,荧光显微镜观察其在COS-7细胞内的表达,采用细胞免疫组织化学法验证蛋白表达.结果 经双酶切和DNA序列测定,证实致病基因mGJA8重组质粒构建成功,荧光显微镜观察在COS-7细胞上致病基因mGJA8蛋白表达,细胞免疫组织化学法显示致病基因表达蛋白在COS-7细胞中特异性表达.结论 成功克隆出该家系的致病基因mGJA8,并且完成了该致病基因在体外真核细胞中的特异性表达,为进一步研究该家系的发病机制奠定基础.
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Cx50 V64G突变的生物信息学分析及其真核表达载体的构建
目的:构建pcDNA3.1/Cx50 V64G真核表达载体,用生物信息学软件分析V64G突变对人缝隙连接蛋白Cx50的影响.方法:经PCR获得Cx50基因片段,重组至真核表达载体pcDNA3.1/Amp(+)中,经PCR,酶切和序列测定方法鉴定重组质粒.结果:获得了具有V64G突变的Cx50的编码基因,并成功构建了其真核表达载体.并证明64位缬氨酸在不同物种的Cx50及在人的多种缝隙连接蛋白是高度保守的区域,与白内障的发生高度相关.结论:pcDNA3.1/Cx50 V64G真核表达质粒的成功构建和鉴定为进一步研究白内障机理奠定了基础.
