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超声微泡介导Rb94联合野生型p53基因对鼠视网膜母细胞瘤的抑制
背景 研究表明,野生型p53(wtp53)和Rb94基因对人视网膜母细胞瘤(RB)的生长均有抑制作用,这2个基因是诱导和维持细胞衰老信号通路中重要的参与基因,因此2个基因联合应用是否对RB的生长抑制效果更好是近来关注的问题. 目的 观察超声微泡介导Rb94联合wtp53基因转染裸鼠RB后对其凋亡的影响.方法 将HXO-Rb44细胞悬液种植至40只雌性SPF级BALB/c裸鼠视网膜下腔建立RB动物模型,造模成功的裸鼠按随机数字表法平均分为模型对照组、wtp53质粒组(含wtp53质粒的微泡悬液)、Rb94质粒组(含Rb94质粒)和wtp53 +Rb94质粒组(联合组)(含wtp53质粒及Rb94质粒),其中模型对照组不做任何处理,其他3个组造模后第7天均由鼠尾静脉注入含相应基因的微泡悬液后,每天以0.5 W/cm2超声波辐照眼球4s,间隔24 s,循环2次.转染基因超声辐照7d摘除肿瘤组织,利用半定量逆转录PCR(RT-PCR)法检测肿瘤组织中wtp53 mRNA及Rb94 mRNA的表达；采用Western Not法检测基因转染的肿瘤组织中wtp53及Rb94蛋白的表达；用免疫组织化学法测定肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达；采用TUNEL法检测基因转染后肿瘤组织的凋亡情况,计算凋亡指数(AI). 结果 HXO-Rb44细胞悬液视网膜下腔注射后移植瘤构建的成功率为80％(32/40),常规组织病理学检查提示检测样本的细胞异型性明显.基因转染后7d,模型对照组无wtp53 mRNA及Rb94 mRNA的表达条带；wtp53组wtp53 mRNA相对值为0.65±0.07,wtp53+Rb94组为0.32±0.02,差异有统计学意义(t=11.743,P=0.000)；Rb94组Rb94 mRNA相对值为0.42±0.03,wtp53 +Rb94组为0.23 ±0.03,差异有统计学意义(t=5.041,P=0.001).wtp53、Rb94或wtp53+ Rb94转染后,各组可见与转染相应的蛋白表达条带,wtp53+ Rb94组可同时检测到wtp53及Rb94蛋白的表达条带,但模型对照组无任何基因反应条带.免疫组织化学染色表明,wtp53+Rb94组肿瘤细胞中VEGF阳性反应强度明显弱于wtp53组、Rb94组和模型对照组.wtp53 +Rb94组AI为37.35±2.14,明显高于模型对照组的0.46±0.05、wtp53组的5.05±0.80和Rb94组的6.43±1.02,差异均有统计学意义(t=-34.395、-28.206、-26.006,P＜0.01).结论 超声微泡造影剂可介导双基因联合转染RB移植瘤,且Rb94联合wtp53基因对RB细胞的促凋亡作用较单基因转染增强.
关键词： 基因转染/Rb94、野生型p53 超声微泡造影剂 视网膜母细胞瘤 凋亡
