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大鼠视神经损伤后Toll样受体4在视网膜中的表达
背景 Toll样受体4(TLR4)是一种重要的免疫相关受体,在多种疾病的发生中起致炎作用.研究发现,视神经损伤后继发的炎症反应可进一步引起视网膜损伤,因此视神经损伤后TLR4的表达及其效应值得研究. 目的 研究大鼠视神经损伤后视网膜TLR4的表达情况. 方法 选取成年健康SPF级SD大鼠24只,按随机数字表法随机分为视神经损伤3d组和视神经损伤7d组.取大鼠右眼用视神经钳夹法制备视神经损伤模型,左眼不予处理为对照组.分别于视神经损伤后3d和7d用过量麻醉法处死大鼠并分离视网膜,采用免疫荧光法检测各组大鼠视网膜中TLR4的表达；分别采用逆转录PCR法(RT-PCR)和Western blot法检测大鼠视网膜中TLR4 mRNA及其蛋白的表达；采用TUNEL染色法观察各组大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡情况.结果 视网膜免疫荧光法检测结果显示,TLR4在大鼠视网膜中呈绿色荧光,视神经损伤3d组和视神经损伤7d组造模眼视网膜中的荧光强度较对照组左眼均明显增强,绿色荧光主要分布在视网膜内层.RT-PCR法检测表明,模型眼视网膜损伤后3d和7d视网膜中TLR4 mRNA相对表达量分别为2.92±0.06和3.92±0.12,对照眼TLR4 mRNA的相对表达量分别为2.87±0.12和3.44±0.17,大鼠模型眼TLR4 mRNA表达的灰度值较对照眼明显增加,差异均有统计学意义(t3d=-12.888,P＜0.001；t7d=-4.669,P=0.010).Western blot法检测显示,大鼠模型眼视网膜损伤3d和7d视网膜中TLR4蛋白的相对表达量分别为1.14±0.05和1.49±0.03,对照眼TLR4蛋白的相对表达量分别为0.99±0.09和1.38±0.07,模型眼视网膜中TLR4蛋白表达量明显高于对照眼,差异均有统计学意义(t3d=-11.324,P＜0.001；t7d=-5.638,P=0.005).TUNEL染色显示,模型眼RGCs凋亡数较对照眼增多. 结论 TLR4在视神经损伤大鼠视网膜内层的表达明显上调,提示TLR4通路可能参与RGCs的损伤.
