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星形胶质细胞活化基因-1(AEG-1)在葡萄膜黑色素瘤中的表达及其与临床组织病理学的关系
目的 研究葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)组织中星形胶质细胞活化基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)的表达及其与临床组织病理学的关系.方法 收集北京同仁医院眼科2013年1月至2017年5月,经眼科病理室确诊为UM且临床资料完善的50例患者(50眼)UM石蜡组织标本为实验组,11例(11眼)因外伤行眼球摘除但大部分葡萄膜组织正常的石蜡组织标本为对照组.应用免疫组织化学法检测所有石蜡标本中AEG-1的表达,并分析UM临床病理学特征与AEG-1的相关性.结果 AEG-1蛋白染色呈粉红色或者红色,主要定位于UM核周、细胞浆和细胞膜.实验组中,AEG-1阴性表达21眼(42.0％),阳性表达29眼(58.0％);对照组中AEG-1均呈阴性表达,两组AEG-1表达比较差异有显著统计学意义(P =0.000),提示AEG-1在UM中高表达.在实验组中,当UM患眼存在临床组织病理学高危因素时,即存在肿瘤累及睫状体、虹膜新生血管生成、肿瘤基底大直径＞16 mm、肿瘤高度＞8mm、肿瘤细胞为混合细胞型、肿瘤细胞属于上皮样或混合细胞型、肿瘤眼外生长的患者,其AEG-1阳性表达率分别为73.1％、73.9％、95.2％、82.4％、83.3％、74.1％、69.4％,明显高于非高危因素患者,以上各特征组AEG-1表达比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).而患者性别、眼别、年龄、累及视盘与否、继发视网膜脱离与否、上皮样细胞型、侵犯巩膜导管与否组AEG-1表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 AEG-1在UM组织中高表达,且与UM临床组织病理学多种高危因素呈显著相关性,提示AEG-1的高表达有可能成为判断UM患者预后的重要指标之一.
关键词： 葡萄膜黑色素瘤 星形胶质细胞活化基因-1 高危因素 免疫组织化学 -
慢病毒介导星形胶质细胞活化基因-1沉默对葡萄膜黑色素瘤生物学行为的影响
目的 探讨星形胶质细胞活化基因-1(AEG-1)对葡萄膜黑色素瘤(UM)生物学行为的影响.方法 培养不同侵袭转移潜能的MUM-2B和MUM-2C细胞系,根据AEG-1基因序列设计出有效RNA干扰(RNAi)靶点序列及RNAi阴性对照scramble序列进行慢病毒载体的制备和病毒包装.在2株细胞系中,经AEG-1-RNAi慢病毒感染的细胞作为慢病毒感染组,空白慢病毒载体感染的细胞作为阴性对照组,未处理的细胞作为正常对照组.采用Real-time PCR、Western blot法分别检测各组细胞中AEG-1转录水平和蛋白表达水平;采用MTT法、Annexin V-APC法、细胞侵袭试验和细胞Transwell试验检测慢病毒介导AEG-1沉默对人UM细胞系生物学行为的影响.结果 成功制备RNAi慢病毒载体而进行病毒包装,然后分别转染对数生长期的MUM-2B、MUM-2C细胞系,2株细胞系中的正常对照组、阴性对照组和慢病毒感染组间细胞中AEG-1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=130.02,P＜0.01;F=144.17,P＜0.01).在MUM-2B细胞系中和MUM-2C细胞系中,染组较阴性对照组AEG-1 mRNA相对表达量分别下降约77.1％和79.8％,差异均有统计学意义(均P＜0.01);正常对照组与阴性对照组细胞中AEG-1 mRNA相对表达量比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).Western blot法检测结果显示,AEG-1蛋白表达水平在2株细胞系中的各组比较,差异均有统计学意义(F=146.17,P＜0.01;F=156.79,P＜0.01),其中慢病毒感染组较阴性对照组蛋白相对表达均显示下调,差异均有统计学意义(均P＜0.01).MTT法检测发现,2株细胞系实验第2～5天,慢病毒感染组细胞增生倍数较阴性对照组明显下降,差异均有统计学意义(t=5.78、30.68、23.99、29.40,均P＜0.01;t=7.88、7.09、5.56、6.60,均P＜0.01);Annexin V-APC法检测发现,2株细胞系中慢病毒感染组凋亡率明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义(t=54.34,P＜0.01;t=11.68,P＜0.01);细胞侵袭试验发现,在2株细胞系中慢病毒感染组侵袭倍数明显低于阴性对照组,差异均有统计学意义(t=16.04,P＜0.01;t=13.98,P＜0.01);细胞Transwell试验发现,在2株细胞系中慢病毒感染组转移倍数均明显低于阴性对照组,差异均有统计学意义(t=12.04,P＜0.01;t=22.43,P＜0.01).结论 慢病毒介导AEG-1沉默后,通过抑制UM细胞AEG-1的转录水平和蛋白表达水平,从而改变UM细胞的生物学行为,一定程度上减缓细胞增生,促进细胞凋亡并降低细胞侵袭和转移的能力.
