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RBD + ODC 及其突变体融合表达质粒的构建和表达验证
目的：构建 RBD + ODC 及其突变体融合表达质粒，并进行验证。方法选取 Ras 下游效应分子Raf-1中能够与 K-Ras 蛋白相互作用的 RBD + CRD 氨基酸片段作为结合结构域，以 ODC 蛋白分子全长作为功能结构域。以正常人胰腺组织的 cDNA 为模板扩增相应的目的基因片段，应用分子克隆的方法通过在引物中引入 GS 片段使结合结构域和功能结构域相连并通过双轮 PCR 法在 ODC 功能位点引入突变，所获得的核苷酸片段均连入 pcDNA3.1真核表达载体中。结果与结论经测序和 Western Bolt 验证，成功构建了RBD + ODC 及突变体 RBD + ODC 的重组质粒，2种质粒均能够在人 HEK293T 细胞中正常表达。
