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磷酸酶及张力蛋白同源物基因对三阴性乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响
目的 探讨上调磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphate and tension homology deleted on chromsometen,PTEN)基因表达对三阴性乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制.方法 对数期人三阴性乳腺癌ZR-75-细胞株随机分为PTEN组、突变型PTEN(mutated PTEN,M-PTEN)组和对照组,PTEN组、M-PTEN组分别转染人野生型PTEN真核表达质粒(pBP-PTEN)、突变型PTEN质粒(pBP-M-PTEN),对照组未作处理.转染后24、48、72 h,MTT法检测3组ZR-75-1细胞生长抑制率,转染后72 h,Transwell法检测3组侵袭细胞比率,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测磷酸化局部黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,P-FAK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)表达水平.结果 PTEN组PTEN蛋白相对表达量(8.49±2.92)高于M-PTEN组(0.77±0.24)(P＜0.05),对照组无PTEN蛋白表达;转染后24、48、72 h,PTEN组细胞生长抑制率[(27.33±21.49)％、(37.20±11.48)％、(48.11±8.14)％]均高于M-PTEN组[(5.98±1.44)％、(6.98±2.84)％、(10.83±3.11)％]和对照组[(1.09±0.33)％、(2.10±0.83)％、(4.20±2.71)％](P＜0.05),M-PTEN组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染后72 h,PTEN组侵袭细胞数目[(24.29±5.82)％]低于M-PTEN组[(56.30±11.84)％]和对照组[(89.29±10.49)％](P＜0.05),M-PTEN组与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);PTEN组G1期细胞比率[(54.89±2.67)％]低于M-PTEN组[(57.02±1.33)％]和对照组[(63.98±1.09)％],S期细胞比率[(36.56±2.10)％]高于M-PTEN组[(35.98±2.67)％]和对照组[(30.78±0.99)％](P＜0.05),G2/G1期细胞比率[(1.85±0.33)％]与M-PTEN组[(1.90±1.10)％]和对照组[(1.91±1.00) ％]比较差异均无统计学意义(P＞0.05),M-PTEN组G1、S、G2/G1细胞比率与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);PTEN组P-FAK蛋白相对表达水平(0.75±0.12)低于M-PTEN组(2.19±0.82)与对照组(3.23±0.62) (P＜0.05),P-Akt蛋白相对表达(2.11±0.42)与M-PTEN组(1.83±0.74)和对照组(1.94±0.53)比较差异均无统计学意义(P＞0.05);M-PTEN组P-FAK、P-Akt蛋白相对表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PTEN抑癌基因可通过抑制乳腺癌细胞FAK磷酸化,抑制肿瘤细胞复制,进而抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭.
关键词： 三阴性乳腺癌 磷酸酶及张力蛋白同源物基因 局部黏着斑激酶 增殖 侵袭 -
抑制PTEN蛋白对抑制性微环境中神经元生长的影响
目的 观察抑癌分子磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)抑制剂bpv(pic)对抑制性微环境中神经元生长的影响,并探讨其可能的机制.方法 进行胎鼠皮层神经元的原代培养,以成年大鼠脑髓鞘膜蛋白作为细胞培养的抑制性底物.取培养后细胞分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不做特殊处理;(2)抑制对照组:培养孔玻片用髓鞘膜蛋白包被;(3)bpv(pic)处理组:髓鞘膜蛋白包被培养孔,培养液中含200 nmol/L bpv(pic).分别于接种后24h、48 h、72 h、5d行实时定量PCR(RT-PCR)检测及免疫荧光染色,观察各组PTEN和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达情况及各组神经元突起生长情况.结果 免疫荧光结果显示,4个时间点各组间细胞轴突长度差异均有统计学意义(P＜0.05);在培养早期(24 h、48 h、72 h),正常对照组细胞轴突长;到后期(5 d),bpv(pic)处理组细胞轴突长.PT-PCR结果显示:3组细胞mTOR及PTEN在4个时间点之间表达量基本稳定,差异均无统计学意义(P＞0.05).同一时间点不同组别细胞间mTOR及PTEN表达量差异有统计学意义(P＜0.05),其中bpv(pic)处理组mTOR及PTEN表达量均明显高于正常对照组与抑制对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抑癌基因PTEN的作用受到阻抑后,抑制性微环境中神经元的生长状况得到改善,可能与磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)/丝-苏氨酸蛋白激酶(Akt)/mTOR通路的活化有关.
关键词： 磷酸酶及张力蛋白同源物基因 抑癌基因 神经再生 原代细胞培养
