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人类疱疹病毒8型基因文献资料
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人类疱疹病毒8型实时荧光定量PCR外标准品的构建
目的 构建人类疱疹病毒8型(HHV-8)基因质粒标准品,以便快速、灵敏、可靠地检测与HHV-8相关疾病患者的病毒载量.方法 提取HHV-8基因组DNA,以HHV-8 ORF26为目的基因设计引物,进行PCR扩增；纯化目的片段与pMD19-T Vector连接并转化到大肠杆菌中；提取重组质粒DNA,并行PCR、测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)构建标准曲线.结果 HHV-8 ORF26目的片段制备成功,获得稳定的重组质粒,保证了目的片段的特异性和序列完整性,标准曲线参数良好,外标准品阈值循环数(Ct)与其相应梯度稀释浓度呈良好的线性关系,扩增效率高.结论 成功构建了HHV-8的Real-time FQ-PCR外标准品,可以快速检测样品中的HHV-8载量.
关键词： 人类疱疹病毒 人类疱疹病毒8型基因 质粒标准品 实时荧光定量PCR 卡波西肉瘤
