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肿瘤转移抑制基因-1文献资料
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TMSG-1蛋白不同功能域重组质粒构建及亚细胞定位
目的 构建肿瘤转移抑制基因-1 (TMSG-1)蛋白不同功能域重组质粒,并观察其亚细胞定位,探讨TMSG-1蛋白的转录活性.方法 以pcDNA3-TMSG-1真核表达载体为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增TMSG-1基因全长及不同截短体片段,与带有Flag标签的真核表达载体pcDNA3连接,转化感受态细胞,氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒,酶切鉴定.用构建的TMSG-1基因各个截短片段的重组质粒转染Hela细胞,Western blot法鉴定蛋白表达.免疫荧光检测各个截短体亚细胞定位.结果 PCR成功扩增得到目的基因片段,并构建得到TMSG-1全长及不同截短片段T1(aa129-aa380)、T2(aa71-aa380)、T3(aa1-aa128)、T4(aa1-aa70)、T5(aa71-aa128)的真核表达载体,经酶切及基因测序鉴定序列完全正确.Western blot检测结果表明各重组质粒有预期长度的蛋白表达.免疫荧光检测结果表明,含有Homeodomain结构域的截短体T2、T3及T5能够入核,其中T2在核内弥漫分布,T3及T5主要定位于核仁.结论 成功构建并表达了TMSG-1全长及不同截短片段的真核表达质粒,其中含有Homeodomain结构域的截短体定位于细胞核.
