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hTERT启动子调控的TRAIL基因载体的构建及表达
目的:构建hTERT启动子调控的TRAIL基因载体,探讨hTERT启动子调控的转基因表达.方法:PCR法扩增膜结合型TRAIL基因,回收产物与带有hTERT启动子的载体连接,构建重组载体phTERT-TRAIL;瞬时转染乳腺癌细胞系MCF-7/ADR;采用RT-PCR法检测外源基因TRAILmRNA水平的表达,流式细胞术(FCM)检测蛋白水平的表达.结果:重组载体phTERT-TRAIL经PCR、酶切出现相应长度的片段;测序结果连入TRAIL基因;目的基因的序列分析结果与Genebank中的数据高度同源;RT-PCR显示细胞中外源基因TRAIL在mRNA水平明显表达;FCM显示转染了重组载体phTERT-TRAIL的细胞较未转染带有TRAIL基因载体的细胞TRAIL蛋白表达水平上调.结论:成功构建重组载体phTERT-TRAIL,hTERT启动子调控的TRAIL基因在乳腺癌细胞系MCF-7/ADR中明显表达.
