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新琼二糖文献资料
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噬琼胶卵链菌β-琼胶酶基因YM01-5的克隆表达及其酶学性质的研究
目的 从青岛近海海水中分离鉴定了1株能够降解琼胶的海洋新菌—嗜琼胶卵链菌(Catenovulurna-garivorans gen.nov.sp.nov.)YM01T,并对其进行了全基因组测序.本文对该菌的1个β-琼胶酶基因YM01-5进行了克隆表达,并对重组琼胶酶的酶学性质进行了研究.方法 利用镍柱亲和层析对重组琼胶酶进行了分离纯化,采用DNS法测定重组酶的酶学性质,薄层层析(TLC)和质谱(MS)法对AgaYM01-5的酶解产物进行分析.结果 β-琼胶酶基因YM01-5全长2 412 bp,编码803个氨基酸,预测分子量为91.6 kD,其催化模块属于糖苷水解酶GH50家族.重组琼胶酶YM01-5酶学性质的研究结果表明,该酶的适温度为40℃,适pH为9.0.在35℃以下具有良好的热稳定性,pH 6～10之间保持较高的稳定性,在该范围的pH缓冲液中放置12 h后,YM01-5仍能保持80％以上的酶活力.此外,该重组琼胶酶降解琼脂糖的Km、Vmax值分别为15.6 mg/mL和188 U/mg,对降解产物的薄层层析及质谱分析结果表明,β-琼胶酶基因YM01-5以外切酶的形式作用于琼脂糖产生新琼二糖作为终产物.结论 该酶降解产物单一,有利于琼胶寡糖的制备,具有较高的工业应用潜力,它的发现也为研究菌株YM01中琼脂糖的代谢通路提供了参考.
关键词： β-琼胶酶YM01-5 克隆表达 酶学性质 新琼二糖
