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鸟氨酸脱羧酶·结直肠肿瘤·基因表达·多克隆抗体文献资料
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人ODC重组蛋白及其多抗的制备和临床应用
目的:构建鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达载体,表达ODC重组蛋白,制备其多克隆抗体并观察其在大肠癌诊断中的意义.方法:从大肠癌组织中提取总RNA,反转录PCR法扩增全长ODC cDNA,将扩增的基因插入表达载体pQE-30的BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点之间,DNA测序验证插入片段.将重组载体转化入宿主菌M15中进行诱导表达,产生含6-His-tag的融合蛋白.Western Blotting法检测表达蛋白.亲和层析法纯化融合蛋白,以该蛋白免疫小鼠制备多抗,免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平.结果:酶切鉴定和DNA测序显示ODC重组表达载体中含有人ODC eDNA全长序列,与NIH基因库的人ODCcDNA比较有99%的同源性.将该重组载体转化入大肠杆菌M15中表达所得蛋白经Western Blotting验证为目的蛋白.纯化融合蛋白,免疫小鼠获得多抗效价较高.免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该抗体检测效果较好,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织(P＜o.05).结论:成功地构建了ODC表达载体、表达出ODC重组蛋白、制备出ODC多克隆抗体,为进一步研究结直肠癌的发病机理及其诊断和治疗方法打下了良好基础.
