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Cad-Ⅱ基因转染的兔骨髓间充质干细胞自体移植术后的表达研究
[目的] 研究Cad-Ⅱ基因转染的骨髓间充质干细胞在骨缺损局部移植后Cad-Ⅱ基因的表达变化.[方法] 20只日本长耳白兔制作双侧髂骨缺损模型,将体外培养扩增的自体骨髓干细胞经脂质体介导转染Cad-Ⅱ基因,再与胶原海绵复合移植于髂骨缺损处,术后4周取材,RT-PCR和免疫组化方法检测Cad-Ⅱ基因的表达.[结果] 术后4周各组骨缺损区已有新骨生成,Cad-Ⅱ基因转染移植组和对照组均检测到Cad-ⅡmRNA的表达,但转染组Cad-Ⅱ mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.01).免疫组织化学染色结果显示,与对照组比较转染移植各组Cad-Ⅱ阳性细胞数量也显著增多(P＜0.01).[结论] 转染了 Cad-Ⅱ基因的骨髓间充质干细胞使骨缺损区Cad-Ⅱ基因的表达增高.
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成骨细胞特异性钙黏蛋白基因转染对人骨髓基质干细胞成骨分化影响的研究
目的 观测成骨细胞特异性钙黏蛋白(Cad-Ⅱ)基因转染对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响. 方法把脂质体介导的Cad-Ⅱ cDNA转染体外分离培养的hBMSCs,检测Cad-Ⅱ蛋白表达变化,并对比观测转染组和单纯成骨诱导组在培养3,7、14、21 d时,hBMSCs碱性磷酸酶(ALP)和骨钙索的表达变化. 结果 转染组和成骨诱导组3 d后开始有ALP的阳性染色,呈棕黑色,7 d开始有骨钙索的阳性染色并随培养时间延长逐渐增多,但各时间点转染组ALP浓度(P=0.008)和骨钙素染色阳性数(P=0.023)均显著高于单纯成骨诱导组.转染组和成骨诱导组从14 d后开始有红色的刚件染色矿化结节出现,结节数目随时间推移而增多. 结论 Cad-Ⅱ基因转染可促进hBMSCs向成骨细胞的分化.
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Cad-Ⅱ基因转染的hMSCs在异种骨基质材料上的粘附和增殖研究
目的 探讨经Cad-Ⅱ(OB-Cadherin,成骨细胞特异性钙粘蛋白)基因转染的人骨髓间允质干细胞(humanmarrow mesenchymal stem cells,hMSCs)在骨基质材料上的粘附性和增殖情况.方法 将脂质体介导的Cad-Ⅱ cDNA转染体外分离培养的hMSCs,再将已转染和未转染的hMSCs分为实验组和对照组,分别与异种冻十脱钙骨基质材料复合体外构建组织工程骨,通过相差显微镜、扫描电镜及MTT检测对比观察两组细胞在材料上的黏附和增殖情况.结果 2组细胞均能在骨基质材料上粘附、伸展、增殖,其中增殖情况无明显差异(P>0.05),但Cad-Ⅱ基因转染组的上架细胞数和上架率(84.5%),显著高于未转染组(71.7%),差异显著(P<0.05).结论 Cad-Ⅱ基因转染能提高种子细胞在支架材料上的粘附性,但对细胞增殖无影响.
