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重组猪胰蛋白酶冻干制剂稳定性研究及在细胞培养中的应用
目的 筛选重组猪胰蛋白酶(rPT)冻干保护剂和保存方法,及配制细胞消化液的稳定性及其应用.方法 在rPT酶液中添加不同浓度不同种类的冻干保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率,并从赋型性、色泽度、溶解性方面评价冻干保护剂的作用;rPT酶液经过无菌过滤处理,内毒素含量检测合格后,冻干.然后配制成细胞消化液,优化细胞消化液组成,将细胞消化液应用于细胞培养.结果 添加3％甘露醇和3％海藻糖的rPT冻干品的酶活性保留率分别为101％和86.5％;用PBS缓冲液配制细胞消化液(含有0.01％ EDTA)消化贴壁细胞的综合效果好,且保存在-20℃时稳定性较好.结论 从冻干后酶活性保留率和冻干品外观评价,3％甘露醇可作为rPT冻干过程中的佳保护剂;rPT细胞消化液应用在细胞培养中的成功,证明rPT可以替代提取的猪/牛胰蛋白酶使用,消除了动物源性病毒等外源因子的污染.
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重组猪胰蛋白酶冻干制剂稳定性研究及在细胞培养中的应用
目的 筛选重组猪胰蛋白酶(rPT)冻干保护剂和保存方法,及配制细胞消化液的稳定性及其应用.方法 在rPT酶液中添加不同浓度不同种类的冻干保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率,并从赋型性、色泽度、溶解性方面评价冻干保护剂的作用;rPT酶液经过无菌过滤处理,内毒素含量检测合格后,冻干.然后配制成细胞消化液,优化细胞消化液组成,将细胞消化液应用于细胞培养.结果 添加3％甘露醇和3％海藻糖的rPT冻干品的酶活性保留率分别为101％和86.5％;用PBS缓冲液配制细胞消化液(含有0.01％ EDTA)消化贴壁细胞的综合效果好,且保存在-20℃时稳定性较好.结论 从冻干后酶活性保留率和冻干品外观评价,3％甘露醇可作为rPT冻干过程中的佳保护剂;rPT细胞消化液应用在细胞培养中的成功,证明rPT可以替代提取的猪/牛胰蛋白酶使用,消除了动物源性病毒等外源因子的污染.
