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表达幽门螺杆菌NAP蛋白的减毒沙门疫苗菌株预防幽门螺杆菌感染
目的建立表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门疫苗菌,并利用人类幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究疫苗菌对Hp感染的免疫保护作用.方法利用分子克隆技术构建携带Hp-NAP基因的重组原核表达质粒pTrc99A-NAP,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与美国国立医学图书馆基因文库中相关序列的同源性进行比较.重组质粒pTrc99A-NAP转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的Hp-NAP蛋白用SDS-PAGE和West-blotting进行鉴定,用薄层扫描分析蛋白含量.C57BL/6小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水(A组)、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261(B组)、携带pTrc99A的SL326组(C组)、携带pTrc99A-NAP的SL326组重(D组).免疫后4周,予Hp攻击,攻击菌量107CFU/只,灌胃2次,每日1次.攻击4周后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察Hp定植情况.结果核苷酸序列测定及同源性分析证实,克隆的Hp-NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98%(397/402),氨基酸序列的同源性为98%(131/133).pTrc99ANAP转化的减毒沙门菌,可表达Mr约15000的Hp-NAP蛋白,表达量约占菌体蛋白量的37.5%;表达的新生蛋白能与小鼠抗Hp血清特异性反应,具有良好的免疫原性.同空白对照组、SL3261组和SL3261(pTrc99A)组相比,表达Hp-NAP的疫苗株组实验动物的胃组织Hp定植密度明显下降(P＜0.05).结论成功构建表达Hp-NAP的减毒沙门疫苗菌;重组疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免疫预防作用,可作为未来多组分重组减毒沙门疫苗菌的侯选菌株之一.
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胃复康颗粒对Hp相关性疣状胃炎湿热证患者血清CagA、 Hp-NAP、VacA的影响
目的:观察胃复康颗粒对Hp相关性疣状胃炎(Hp VG)湿热证患者血清CagA、Hp-NAP、VacA浓度的影响.方法:将135例Hp VG湿热证患者随机分成三组各45例,中药组服用胃复康颗粒(蒲公英、紫花地丁、太子参、黄连、山药、浙贝母、白花蛇舌草、蚤休、海螵蛸、佛手、枳实、厚朴、茯苓、炙甘草)治疗;联合组服用胃复康颗粒联合泮托拉唑钠肠溶片治疗;西药组单纯口服泮托拉唑钠肠溶片治疗,各组服药疗程均为6周.检测治疗前后三组血清CagA、Hp-NAP、VacA浓度的变化.结果:三组治疗后血清CagA、Hp-NAP、VacA浓度均较治疗前降低,联合组低于中药组、西药组,中药组低于西药组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:胃复康颗粒及其联合西药均能使Hp VG湿热证患者血清CagA、Hp-NAP、VacA浓度降低,联合组疗效优,提示胃复康颗粒可能是通过下调血清CagA、Hp-NAP、VacA浓度,从而以降低Hp的毒力效应,减轻炎症反应.
