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5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中 MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响
目的：探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2′-脱氧胞苷（5′-Aza-2′-deoxycytidine）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法：用不同浓度5′-氮杂-2′-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果：Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol／L 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调，实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090；在LoVo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。 Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051；LoVo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性，MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达（F=8.918， P=0.010）和LoVo细胞株表达（F=8.351，P=0.011）具有统计学意义。 MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达（F=226.825， P=0.000）和LoVo细胞株表达（F=153.642，P=0.000）亦具有统计学意义。结论：结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5′-氮杂-2′-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
关键词： DNA甲基化 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷 Ht-29 Lovo MLH-1基因 -
5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对 HT-29和 LoVo结直肠癌细胞株中 p16基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响
目的：探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2′-脱氧胞苷（5′-Aza-2′-deoxycytidine，5′-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和Lo-Vo中p16基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响。方法应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR法、SYBR Green PCR法及蛋白印迹实验（ Western blot ）检测不同浓度5′-Aza-CdR处理前后HT-29和LoVo细胞中p16基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 TaqMan 探针为基础的实时定量PCR法检测HT-29和LoVo细胞中p16蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0．5、1．0、1．5μM 5′-Aza-CdR处理后p16基因mRNA和蛋白均重新表达，具有统计学意义（P均＜0．05）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5′-Aza-CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
关键词： DNA甲基化状态 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷 Ht-29 Lovo p16基因 -
5-Aza-dC、TSA 腹腔注射治疗小鼠子宫内膜异位症疗效观察
目的：观察5′-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-dC）、曲古抑菌素A（ TSA）腹腔注射治疗小鼠子宫内膜异位症（内异症）的疗效。方法取35只BALB／c小鼠，将子宫片段分别缝于双侧腹膜、双角子宫起始处及肠系膜处制作内异症模型。建模3周后分为4组，5-Aza-dC组腹腔注射5-Aza-dC 0．5 mg／（kg· d），TSA组腹腔注射TSA 0．5 mg／（ kg· d），达那唑组给予达那唑110 mg／（ kg· d）灌胃，模型对照组腹腔注射等量生理盐水。分别于给药前及给药3周测算各组异位内膜病灶体积。8只小鼠正常饲养，设为正常对照组，采用醋酸扭体实验评估各组小鼠给药1、3周时的疼痛反应。结果5-Aza-dC组、TSA组及达那唑组给药3周时异位内膜病灶体积较给药前明显缩小（P均＜0．01）。模型对照组与正常对照组相比，疼痛反应时间缩短、扭体次数增加（P均＜0．01）；5-Aza-dC组、TSA组组内不同给药时间的疼痛反应时间、扭体次数相比，P均＜0．05；5-Aza-dC组、TSA组疼痛反应时间较模型对照组延长、扭体次数减少（P均＜0．05）。结论5-Aza-dC、TSA治疗小鼠内异症有效，可减小异位病灶体积，同时减轻疼痛。
关键词： 子宫内膜异位症 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 动物实验
