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超高效液相色谱内标法测定学龄儿童血清中维生素A水平
目的：：建立反相超高效液相色谱(UPLC)内标法测定儿童血清中维生素A(VitA)水平的方法,以了解学龄儿童VitA营养状况,为制定膳食营养计划提供参考。方法：阜阳市颍上县学龄儿童100μl血清加入100μl内标后,振荡混匀,正己烷1.0 ml萃取后离心,取上清液用N2吹干,200μl无水乙醇复溶,UPLC法测定。色谱条件为色谱柱：Waters C18柱(2.1 mm ×100 mm,1.7μm)；二级阵列管检测器；流动相：乙腈：水(94：6)临用前脱气；检测波长325 nm；柱温：40℃；流速：0.3 ml/min；进样2μl。结果：360例学龄儿童血清VitA含量在0.0728~0.728μg/ml范围内呈良好的线性关系(r>0.999),VitA的平均值为39.60μg/dl,CV<5％,VitA的低检测限为0.020μg/ml,测定在4.0 min内完成。360例学龄儿童中VitA含量≤20μg/dl占总人数的1.11％,VitA水平20~30μg/dl占总人数的19.17％,VitA水平≥30μg/dl占总人数的79.72％。结论：调查结果总体满足膳食营养计划的要求。反相UPLC内标法检测儿童血清中VitA的水平,方法快速、灵敏、准确,重复性好,样品处理简单宜行。
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重组人粒细胞刺激因子的N端氨基酸序列异质性分析
目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的N端异质性.方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中N端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4 (2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1％三氟乙酸水溶液(A)-0.1％三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL· min-1.分别收集各组分并冷冻干燥,采用N端测序仪测定各组分的N端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对N端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围(m/z)500～3 000.结果:色谱分离得到3个组分;N端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个N端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与N端测序结果一致.结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的N端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持.
