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U87细胞分泌外囊泡中HOTAIR刺激胶质瘤血管新生的机制研究
[目的]研究人脑胶质瘤细胞U87分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)中HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense intergenic RNA,HOTAIR)对人脑胶质瘤血管生成的作用及可能的分子机制.[方法]将U87细胞分为4组:siGFP组、si-NC组、siHOTAIR组和回复组.脂质体法转染U87细胞,收集转染后的细胞上清液,与人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMVEC)共培养.荧光定量PCR检测U87细胞的转染效率.噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)染色、克隆形成、细胞迁移及成管实验检测转染后细胞培养上清液中HOTAIR基因对HBMVEC增殖、迁移和成管能力的影响.采用RNase和Triton X-100处理U87细胞培养上清液,设空白组、RNase组、Triton X-100组、RNase和Triton X-100联合组,试剂盒提取细胞培养上清液中总RNA,荧光定量PCR检测各组上清液HOTAIR基因含量.[结果]与si-NC组比较,siHOTAIR组的HOTAIR表达明显降低(P<0.05);回复组与siHOTAIR组相比,HOTAIR表达明显升高(P<0.01).与siHOTAIR组U87细胞培养上清液共培养,HBMVEC增殖、形成克隆数量、迁移能力以及成管能力均明显降低(P<0.01).与空白组相比,RNase组、Triton X-100组U87细胞上清液中HOTAIR基因表达量无明显差异(P>0.05),而RNase和Triton X-100联合组的HOTAIR基因表达量显著降低(P<0.01).[结论]沉默HOTAIR基因可以抑制U87细胞促血管生成活性,U87细胞可能通过分泌到EVs中的HOTAIR分子参与胶质瘤血管生成调控.
