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双组份调节系统文献资料
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金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制
目的：初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制。方法：PCR扩增双组份调节系统SaeRS的反应调节蛋白SaeR基因，构建重组表达质粒pET28a-saeR，用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白His SaeR，用镍离子螯合亲和层析法纯化，用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75ΔsaeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白His SaeR对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果：重组表达质粒pET28a-saeR构建成功；在0.4 mmol/L IPTG，25℃培养12 h的条件下，重组蛋白His SaeR在大肠杆菌中以可溶形式高效表达；与SA75野生株相比，?saeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB基因转录水平均明显下降，分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%；psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白SaeR能有效结合luk-PV、hla、coa、fnbB及其自身P1启动区序列。结论：金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对luk-PV、hla、coa、fnbB基因表达具有正调控作用，而这种作用可能是通过反应调节蛋白SaeR与这些基因启动区序列直接结合而实现。
关键词： 金黄色葡萄球菌 双组份调节系统 saeRS 反应调节蛋白SaeR
