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miRNA-129-5p靶向调控VCP基因在人骨肉瘤细胞中表达初步探讨
目的：含缬酪肽蛋白（valosin-containing protein， VCP）基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移，但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方法运用生物信息学预测软件TargetScanhuman 6．2（http：//www．targetscan．org/）预测miRNA-129-5p在VCP基因（ NM_007126）可能的作用位点。构建野生型VCP 3′UTR报告基因载体（ psi-VCP Vector ）及预测位点突变型VCP 3′UTR报告基因载体（psi-VCPmut Vector），测序鉴定。细胞转染分4组，psi-VCP Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP实验组，psi-VCP Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP对照组；psi-VCP突变Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变实验组，psi-VCP突变Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变对照组。分别检测荧光海肾素酶活性。结果 Targetscan软件预测结果显示miRNA-129-5p在VCP 3′UTR163-169 bp有且仅有1个保守作用位点；VCP 实验组荧光海肾素酶活性（15．529±1．902）低于VCP 对照组（21．781±0．854）、VCP 突变实验组（19．978±1．377）、VCP突变对照组（21．952±1．516），差异有统计学意义（P＜0．05）；VCP突变对照组（21．952±1．516）与VCP对照组（21．781±0．854），差异无统计学意义（P＝0．276）。结论 miRNA-129-5p在骨肉瘤细胞U2-OS中可能靶向调控VCP基因的表达及调控位点。
关键词： miRNA-129-5p 含缬酪肽蛋白 骨肉瘤 靶向调控 -
转染miRNA-129-5p对MCF-7细胞化疗敏感性及ABCB1表达的影响
目的:探讨miRNA-129-5p转染是否可提高乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性及其可能机制.方法:取对数生长期的MCF-7细胞,分别转染miRNA-NC和miRNA-129-5p,24 h后分别加入不同浓度的紫杉酸处理48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖.根据细胞是否转染miRNA-129-5p和紫杉醇刺激培养将MCF-7细胞分为空白对照组、转染试剂组、转染miRNA阴性对照组(miRNA-NC组)、miRNA-NC+紫杉醇组、miRNA-129-5p组和miRNA-129-5p+紫杉醇组.利用流式细胞术检测细胞凋亡,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测MCF-7细胞ABCB1、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白的表达.结果:与其他组比较,miRNA-129-5p转染细胞用紫杉醇处理后,MCF-7细胞增殖受抑,凋亡细胞增多,ABCB1和Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低,而Bax mRNA和蛋白的表达升高(P均<0.05).结论:miRNA-129-5p可能通过下调ABCB1的表达提高MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性.
关键词： miRNA-129-5p ABCB1 肿瘤耐药 乳腺癌 -
miRNA-129-5p干扰技术对胆道闭锁小鼠胆道EMT作用机制的研究
目的 探讨miRNA129-5p在胆道闭锁上皮间质转化(EMT)中的作用机制.方法 构建胆道闭锁小鼠模型(实验组),取实验组胆道组织,构建TGF-β1诱导的胆管上皮EMT细胞模型,检测TGF-β1诱导刺激后胆道上皮细胞株EMT相关标志物表达水平,并检测miRNA-129-5p的表达变化.同时转染miRNA-129-5p的前体,比较转染前后TGF-β1刺激下胆道上皮细胞EMT相关标志物及细胞外基质的表达改变.结果 实验组小鼠肝脏肝外胆道呈EMT样改变,miRNA-129-5p在实验组小鼠中的表达水平下调(P＜0.05),过表达miRNA-129-5p可以抑制EMT的进程(P＜0.05).结论 miRNA-129-5p可能通过TGF-β1通路调控胆道上皮EMT的进程.
关键词： 胆道闭锁 miRNA-129-5p 上皮间质转化
