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三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响
目的:观察三种Tyrphostins AG1109、AG555和AG1394对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用.方法:利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的[32P]放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1109对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为9.7 μmol/L,抑制作用稍大于已知CK2抑制剂DRB和A3.AG555对重组人CK2全酶具有一定的抑制作用,而AG1394则对人CK2全酶基本无影响.AG1109对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用.结论:AG1109不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用
背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的.CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗.为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostin中的AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用,以探讨其酶动力学机制.方法:利用基因工程克隆、表达和纯化而获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的[32P]放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1109对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,其IC50为9.7μmol/L,抑制作用稍大于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3).AG1109对重组人CK2的动力学研究表明,它与GTP呈以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用.结论:AG1109是一种很强的重组人CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
