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4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28,N-87细胞生长中作用的实验研究
目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用.方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Westem-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况.结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-87 24 h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72 h,抑制作用逐渐增强.流式细胞术结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感.Western-blot结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化.结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用.
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雷帕霉素、RAD001抑制胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的实验研究
目的 探讨雷帕霉素(rapamycin)、RAD001(everolimus)对胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 体外培养人胃癌MKN-28、MKN-45细胞,给予雷帕霉素、RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布情况.结果 雷帕霉素、RAD001均可抑制MKN-28、MKN-45细胞生长,抑制作用具有时间依赖性,雷帕霉素作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为23.40%、36.26%;RAD001作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为25.12%、40.11%.72 h时RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-28、MKN-45细胞计数差异有显著性(P<0.05).RAD001作用24 h后MKN-28、MKN-45细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加.RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-45细胞周期差异有显著性(P<0.05),MKN-28细胞周期差异无显著性(P>0.05).结论 两种药物相比较,RAD001相对敏感;两株细胞相比较,MKN-45相对敏感.RAD001通过调节细胞周期进而抑制胃癌细胞的增殖.
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ARHI真核表达质粒对胃癌恶性表型的影响
目的 观察外源ARHI在胃癌细胞中过表达对胃癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响.方法 构建pEGFP-ARHI表达载体,并通过lipofectamineTM 2000将其转入ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中作为实验组,空载质粒pEGFP-N1转入MKN-28作为空载组,未处理MKN-28细胞作为未处理组.通过荧光显微镜及Western blot检测外源ARHI的表达,采用增殖实验、损伤刮擦实验、体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测过表达ARHI胃癌细胞MKN-28的增殖能力、侵袭和迁移能力的变化.结果 ARHI在胃癌细胞系MKN-28中表达较低,成功构建重组真核表达质粒pEGFP-ARHI并成功转染MKN-28细胞后,CCK8法检测显示,相对于空载组和未处理组,转染pEGFP-ARHI的实验组细胞增殖变慢(P＜0.05),Transwell小室实验显示实验组细胞侵袭能力减弱(P＜0.05),细胞划痕实验表明实验组细胞迁移能力减弱(P＜0.05).结论 在ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中表达重组质粒pEGFP-ARHI能够抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力.
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景洪哥纳香醇提物对两株人肿瘤细胞体外细胞毒作用初探
目的:观察景洪哥纳香醇提物体外抗肿瘤活性.方法:通过改良MTT法,考察不同浓度的洪哥纳香醇提物体外对人胃癌细胞MKN-28及人肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒作用.结果:100μg/mL景洪哥纳香醇提物对MKN-28、SMMC-7721的细胞增殖抑制率可达95%以上.在一定的剂量范围内,洪哥纳香醇提物对MKN-28的增殖抑制能力具有一定的剂量依赖性,而对SMMC-7721则不明显.其IC50分别为31.02μg/mL、18.88μg/mL.结论:景洪哥纳香醇提物体外对MKN-28、SMMC-7721具有显著的抗肿瘤活性.
