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Capto DEAE凝胶文献资料
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新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨
目的：探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后，采用DEAE－Sephadex A－50凝胶进行吸附，经洗涤、洗脱得到洗脱液；将得到的洗脱液超滤脱盐后，再通过Capto DEAE凝胶柱纯化，制备凝血酶原复合物（ prothrombin complex concentrates ，PCC）。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率；采用Bradford法测定PCC蛋白浓度，再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性，计算有效成分的比活；以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下，所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高，且该3种凝血因子均衡度较好；但FⅦ收率和纯度均较低；其中A方案下PCC收率和纯度较好，即Capto DEAE 凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、NaCl、pH分别为0．020～0．028 mol／L、0．10～0．15 mol／L、6．9～7．2；0．012～0．020 mol／L、0．10～0．15 mol／L、6．9～7．2；0．005～0．012 mol／L、2．4 mol／L、7．2～7．5时，FⅨ收率为（74．40±10．89）％，比活为（3．31±0．31） IU／mg，抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE－Sephadex A－50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC ，在所选择条件下，PCC制品的纯度为2．17～3．31 IU／mg，远优于传统工艺制得的产品，此为高品质PCC的制备提供了新的方法。
关键词： 凝血酶原复合物 Capto DEAE凝胶 离子交换柱层析
