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乳腺表达载体文献资料
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蚓激酶基因在山羊乳腺中的瞬时表达
构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和蚓激酶基因cDNA的乳腺表达载体pβLK.通过直接注射将重组载体DNA导入山羊的乳腺组织,以纤维蛋白平板法测定乳汁中蚓激酶基因表达产物的活性.实验证实蚓激酶基因可以在山羊乳腺中瞬时表达.在进行山羊乳腺的瞬时表达时,适宜的注射剂量为500μg/ml.注射后6～9 h的表达量高,达到2.0×105U/L,并持续表达至60h.
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人α-防御素-1(α-HNP-1)基因乳腺定位表达载体的构建及表达
目的:将人α-防御素-1(α-HNP-1)基因与山羊β-乳球蛋白(Beta-Lactoglobulin, BLG)基因5'调控区序列融合,构建α-HNP-1基因的乳腺定位表达载体并对其进行检测.方法:用PCR方法获得α-HNP-1基因片断并克隆于pMD18-T载体,经DNA测序证实α-HNP-1基因序列无误后,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1-HNP-1重组质粒.用PCR方法扩增出BLG基因5'区调控序列并克隆到pcDNA3.1-HNP-1中,构建乳腺定位表达载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1,该载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达.结果:经酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1构建正确,经ELISA检测,大鼠乳汁中有α-HNP-1表达,其48 h表达量为27.67 ng/ml,72h表达量为49.00 ng/ml.结论:成功构建了α-HNP-1基因乳腺定位表达载体并终在乳腺获得一定量表达,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异表达载体的可行性方法.
