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重组人血管内皮抑素的阳离子交换色谱复性与纯化条件研究
对rhEndostatin包涵体蛋白的色谱复性条件进行研究,摸索出佳的复性、纯化条件,解决其在大肠杆菌中表达提取时遇到的蛋白变性问题.按实验条件对表达的rhEndostatin包涵体蛋白进行提取、洗涤、变性;利用正交法设计重组蛋白的色谱复性、纯化实验;利用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换柱对rhEndostatin包涵体蛋白进行了色谱复性、纯化.佳复性条件为rhEndostatin上样浓度为2.5 mg/mL,洗脱体积流量为1/20床体积/min(3.5 mL/min),NaCl浓度0.1 mol/L,GSH/GSSG的浓度比为3/0.3 mmol/L.在此条件下纯度约97%,蛋白回收率为90%,重组蛋白的活性高,IG50达到5 μg/mL.
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高效阳离子交换色谱法测定槟榔中槟榔碱的含量
目的:建立槟榔中槟榔碱的含量测定方法.方法:以高效阳离子交换色谱-紫外检测器分离测定槟榔碱,并考察提取过程中的关键步骤及整个方法学.结果:重复性试验RSD=2.3%(n=6),加样回收率为98.6%(RSD=5.0%,n=6).结论:本法快速、简便、专属性强、灵敏度高,可应用于控制槟榔及其成方制剂中的槟榔碱含量.
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阳离子交换色谱柱上聚合血红蛋白研究
采用柱上聚合的方法制备血红蛋白溶液,解决传统血红蛋白聚合过程中由于戊二醛的活性过高导致平均分子量大、产物分子量分布宽的问题.该方法利用阳离子交换剂对修饰度(聚合度)小的血红蛋白吸附能力大的原理,使其在柱上富积,同时加入戊二醛进行聚合反应.结果表明该方法能比较有效地缩小聚合血红蛋白的分子量分布.
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槟榔碱的含量测定
采用高效阳离子交换色谱法,对氢溴酸槟榔碱含量测定的佳条件为:流动相乙腈-磷酸(50:45);检测波长215nm;柱温35℃;流速1.0mL/min.在上述色谱条件下,槟榔碱的保留时间为17.02min,分离度良好.