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细胞内钙流释放文献资料
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蛋白酶激活受体2在人角质形成细胞中的表达及功能测定
目的 分析人皮肤角质形成细胞中蛋白酶激活受体2(PAR2)的表达及其生物学功能,探讨其在皮肤屏障中的作用.方法 以体外培养的人皮肤角质形成细胞原代细胞或细胞系N//TERT细胞为研究对象,通过免疫荧光染色及蛋白印迹分析细胞中PAR2的表达及分布特点,采用荧光标记的钙流释放法测定PAR2的生物学功能,利用PAR2的天然底物胰蛋白酶或其激活肽、对照肽及拮抗肽诱导PAR2的活化,观察不同作用底物诱导PAR2活化的特点.结果 在正常培养条件下,PAR2在皮肤角质形成细胞中呈中低水平表达,不同的培养基组成及培养时间对PAR2的表达水平无明显影响.PAR2的作用底物诱导细胞的钙流释放具有时间及浓度依赖性特点,其中使用50 ～ 250 nmol/L胰蛋白酶作用于角质形成细胞后,可以诱导细胞内钙流释放；使用75 ～ 250 μmol/L PAR2特异性激活肽PAR2-AP(H2N-SLIGKV-COOH)处理角质形成细胞后,即可大程度地诱发PAR2的活化.而在相同浓度PAR2的拮抗肽PAR2-ANTAP(H2N-FSLLRY-COOH)作用下,PAR2的作用底物所诱导的细胞钙流释放明显受到抑制.分析比较相关荧光强度发现,PAR2激活底物诱导的细胞内钙流释放可以在瞬间(0～ 250 s)完成,以50 s的作用时间点细胞内钙流释放强度大.此外,PAR2的激活可以显著增加皮肤角质形成细胞ERK蛋白的磷酸化水平,从而激发细胞内MAPK信号转导通路.结论 皮肤角质形成细胞表面表达有PAR2受体,该受体活化受胰蛋白酶及PAR2的特异性激活肽调控,PAR2的活化可影响角质形成细胞的生理功能,诱导细胞内钙流释放.
