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实时定量PCR分析MT1-MMP/TIMP-2/MMP-2在不同来源人血管内皮细胞株中的表达
为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEG-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异.实时定量PCR分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT1-MMP在EAhy926中表达高,TIMP-2在3株细胞中呈现相似的表达量,在ECV304中相对表达较高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的高表达.MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中的高表达可能与该类内皮细胞独特的来源、表型特点和功能有关.
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膜型基质金属蛋白酶在人血管内皮细胞株中的表达
目的 探讨膜型基质金属蛋白酶(memberane-type matrix metalloproteinases, MT-MMPs)在内皮细胞中的作用.方法 用Clustal W软件(http://www.ebi.ac.uk/clustalw)比较6种MT-MMPs的蛋白序列同源性,并描绘出进化树,用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术检测HMEC-1、ECV304和EAhy926 3株内皮细胞株中MT-MMPs的mRNA表达差异.结果 蛋白质序列同源比较结果提示,MT-MMPs各成员间氨基酸一致性为31%～65%,RT-PCR检测结果发现6种MT-MMPs在3株不同细胞中呈现不同的表达谱.结论 MT-MMPs在不同血管内皮细胞株中的表达差异,可能与各内皮细胞不同的来源、表型特点和各自具有不同的功能有关.
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绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转染骨髓间充质干细胞、乳鼠心肌细胞、Eahy926细胞表达特征的共聚焦分析
目的 利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征.方法 应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病毒载体,将GFP、RFP以同时或先后方式共转染hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞,激光共聚焦显微镜观察2种报告基因在不同细胞中的共表达特点.结果 3种细胞均能被GFP、RFP共转染,其中hMSC和乳鼠Myo均有竞争加随机转染方式,Eahy926只有随机转染方式;3种细胞转染GFP、RFP的效率有所不同,共表达2种报告基因的细胞表现为以核为中心的表达区域重叠.结论 hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞均可共转染2种报告基因,但整合方式有所不同,这将对利用多个报告基因同时示踪细胞多种生命特征提供有力帮助.
