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用随机引物多态性DNA聚合酶链反应鉴别新的裂体吸虫X
目的鉴定新的裂体吸虫χ的基因组DNA.方法应用随机引物多态性DNA聚合酶链反应(RAPD-PCR)对裂体吸虫χ(S.χ) 和日本血吸虫(S.j)的基因组DNA进行分析鉴别.感染了S.χ和S.j尾蚴的兔45 d后杀死,各取成虫50条,磨碎,用苯酚-氯仿抽提法提取基因组DNA.反应在PCR扩增仪上进行,应用29个随机引物,1.4%琼脂糖凝胶电泳后观察、照相.结果 29个引物中2个引物,J01碱基CCCGGCATAA和L12碱基GGGCGGTACT的扩增产物在两者间显示出明显的差异带.引物J01S.χ特异性条带1条,S.j特异性条带1条.引物L12 S.χ特异性条带3条,S.j特异性条带1条.结论 S.χ和S.j的基因组DNA在J01和L12的6个位点的序列有所不同,出现了差异带,这在种间进化方面有鉴别价值.
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一种裂体吸虫与日本血吸虫蛋白质差异研究
目的探讨裂体吸虫x(S.x)和日本血吸虫(S.j)的蛋白质有无差异.方法采用SDS-PAGE法.感染了S.x和S.j尾蚴的兔45 d后剖杀,从肠系膜静脉血管中取出成虫,各20对,匀浆,高速离心后取上清液,电泳,分离胶和浓缩胶分别为10%和4%.电泳完成后以考马斯兰R250染色.应用分子分析软件系统Gel Doc1000(BIO-RAD)进行分析,并计算出S.x与S.j的比值(S.x/S.j).结果 S.x和S.j蛋白带各有26条,其中35.0 kDa和109.8 kDa为S.x和S.j分别特有的蛋白带,它们之间存在明显的差异;S.x和S.j的87.3 kDa,40.9 kDa和32.2 kDa蛋白质量差异达2倍.15.2 kDa蛋白质量差异1.9倍,73.2 kDa蛋白质量差异1.7倍.结论 S.x和S.j成虫可溶性蛋白所分出的带数经定性、定量分析,差异明显.
关键词： 血吸虫χ 日本血吸虫 蛋白质 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
