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等位基因特异的扩增文献资料
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通用TaqMan探针技术在apoE基因3937T/C单核苷酸多态性检测中的应用
目的建立一种基于通用TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR方法,用于检测apoE基因第四外显子上的一个单核苷酸多态性(SNP)位点(3937T/C).方法应用PCR-RFLP分型方法建立apoE 3937T/C多态性分析的参考样本,同时对部分样本进行PCR产物直接测序以验证PCR-RFLP分型结果.选择一对能够有效区分3937T/C多态性的等位基因特异的上游引物,配对进行通用YaqMan探针实时PCR扩增,然后通过比较两个平行反应达到阈值时所经历的循环数(Ct)的大小,对apoE 3937T/C多态性进行区分.结果建立的基于通用TaqMan探针技术的实时荧光PCR方法,用于apoE基因第四外显子上3937T/C SNP分析,检测结果与PCR-RFLP方法、DNA测序法结果完全一致.结论在进行PCR扩增条件优化的前提下,应用通用TaqMan探针对PCR进行全程监测是可行而且是非常经济的;基于通用TaqMan探针技术的等位基因特异的实时荧光PCR方法敏感、简单、快速,可实现对apoE基因3937T/C单核苷酸多态性的快速检测,而且在其他的SNP位点高通量分析中具有潜在的应用价值.
