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精氨酸加压素对大鼠背根神经节神经元GABA激活电流的增强作用
越来越多的研究表明,精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)在痛觉调制中具有镇痛作用.已报道的研究专注于AVP镇痛的中枢作用机制,而本研究旨在研究AVP镇痛的的外周作用机制.应用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,观察AVP对GABA激活电流(IGABA)的增强作用以及AVP对GABAA受体功能的影响.结果显示,AVP(1 × 10-10～1×10-5 mol/L)预处理后,IGABA增大,GABA剂量效应曲线上移,IGABA的大值较之对照增加约49.1％;而EC50值几乎不变,表示此种加强为非竞争性的,而且AVP对GABA电流的作用可能是电压非依赖性的.AVP对IGABA的加强作用几乎完全被Via受体的拮抗剂SR49059(3×10-6 mol/L)阻断.二次钳压技术胞内透析非水解GDP类似物GDP-β-S(5×10-4 mol/L)或PKC抑制剂GF109203X(2×10-6 mol/L)也可以阻断AVP对IGABA的加强作用.以上结果提示,AVP经由G蛋白耦联受体以及PKC信号通路上调DRG神经元GABAA受体的功能,可能是其诱导镇痛作用的基础.
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通过膜片钳玻璃微电极内插管进行胞内透析
本文介绍了一种膜片钳微电极内插管进行胞内透析的方法.利用通用的微电极夹持器在其抽吸负压的侧管上方钻一斜孔直通夹持器中央管腔.插入由微量移液管头拉制成的细管(外径约0.1 mm),后者与Ag-AgCl电极一起伸出夹持器口端.通过相连的注射器,可以很方便地进行电极内液置换及胞内药物透析.此法和二次钳压技术及国外介绍的微插管电极内液置换法相比,更加简便易行,结果更可靠.
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多巴胺对大鼠脊髓背根神经节神经元ATP-激活电流的调制作用
目的: 研究多巴胺(DA)对ATP-激活电流(IATP)的调制作用.方法: 在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,记录DA对IATP的影响.结果: 大部分受检细胞(89.5%,77/86)对ATP敏感,10-6～10-3 mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此77个细胞中,预加DA对IATP的影响如下:在50.6%(39/77)的细胞产生抑制作用,28.6%(22/77)的细胞产生增强作用,其余的无明显作用(20.8%,16/77).在浓度10-7～10-3 mol/L范围DA对IATP的抑制或增强作用依赖于多巴胺的浓度.胞内透析GDP-β-s上述抑制或增强作用可完全被取消.结论: DA对IATP的抑制作用可能是由于多巴胺受体激活后经G蛋白偶联使ATP(P2X)受体磷酸化所致.
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SKF38393抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流
目的:探讨多巴胺D1受体的选择性激动剂SKF38393 HCl对ATP-激活电流的作用.方法:在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,记录SKF38393对ATP-激活电流的作用.结果:大部分受检细胞(87.5%,77/88)对ATP敏感,10-6～10-3mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此77个细胞中,预加SKF38393可引起三类反应:①外向电流(7.8%,6/77);②内向电流(26.0%,20/77);③无反应(66.2%,51/77).与ATP-激活电流相比,SKF38393-激活电流幅值小,无明显去敏感现象.预加SKF38393 30～60 s对ATP-激活电流的影响如下:在74.0%(57/77)的细胞产生抑制作用,15.6%(12/77)的细胞产生增强作用,其余的无明显作用(10.4%,8/77),本文主要针对此抑制作用进行探讨.此种抑制作用与SKF38393本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关.在浓度10-9～10-4mol/L范围SKF38393对10-4 mol/L ATP-激活电流的抑制作用依赖于SKF38393的浓度.胞内透析H7上述抑制作用可完全被取消,而胞内透析H9此抑制作用依旧存在.结论:SKF38393对ATP-激活电流的抑制作用可能是由于D1受体激活后经G蛋白偶联及PKC途径使ATP受体磷酸化所致.
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NPA抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流
目的本研究主要探讨多巴胺D2受体的选择性激动剂R(-)-NPA对ATP-激活电流的调制.方法在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,观察了NPA对ATP-激活电流的作用.结果大部分受检细胞(87.3%,48/55)对ATP敏感,10-6～10-3 mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此45个细胞中,预加NPA 可引起三类反应:(1)外向电流(6.3%,3/48);(2)内向电流(25.0%,12/48)和(3)无反应(68.8%,33/48).与ATP-激活电流相比,NPA-激活电流幅值小,无明显去敏感现象.预加NPA 30～60 s对ATP-激活电流的影响如下:在91.7%(44/48)的细胞产生抑制作用,其余的无明显作用(8.3%,4/48).此种抑制作用与NPA本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关.在浓度10-7～10-5 mol/L范围NPA对10-4 mol/L ATP-激活电流的抑制作用依赖于NPA的浓度.胞内透析GDP-β-s上述抑制作用可完全被取消.结论 NPA对ATP-激活电流的抑制作用可能是由于D2受体激活后经G蛋白偶联及相应胞内转导途径而使ATP受体磷酸化所致.
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非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活外向电流的分析
应用双电极电压钳记录及胞内透析方法对非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活外向电流进行了分析.结果表明,ATP电流的H成份仍为K+外流所致,而其胞内机制也有PKC参与.
