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TRIM21促进T淋巴细胞凋亡的分子机制及临床应用价值分析
目的 探讨E3连接酶TRIM21在anti-Fas诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用及其分子机制,为评价TRIM21在临床上的应用奠定基础.方法 构建TRIM21真核表达载体,设计TRIM21干扰片段,分别将它们过度表达于Jurkat T淋巴细胞中.将流式细胞仪分选的阳性细胞分为空载无药物组、空载药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21无药物组和TRIM21药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)分别进行药物处理,将转入对照双链小干扰RNA(siRNA)与TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴细胞分为对照siRNA无药物组、对照siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21 siRNA无药物组和TRIM21 siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h),并采用Annexin V/碘化丙啶双染法测定Jurkat T淋巴细胞的凋亡率.将分选Jurkat T淋巴细胞分为空载组和TRIM21过表达组,分别采用蛋白质免疫印迹法与实时定量聚合酶链反应检测TRIM21过度表达对抗凋亡蛋白c-FLICE抑制蛋白(FLIP)的蛋白质及mRNA水平表达的影响.结果 空载药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于空载无药物组(P＜0.001),TRIM21药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于TRIM21无药物组(P＜0.001).对照siRNA药物处理组的JurkatT淋巴细胞凋亡率显著高于对照siRNA无药物组(P＜0.001),但TRIM21 siRNA药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率大大降低,显著低于对照siRNA药物处理组(P＜0.001).以空载组的c-FLIP(L)蛋白质表达量为100％,TRIM21过表达组则为(31.25±0.25)％.以空载组的c-FLIP(L) mRNA表达量为100％,TRIM21过表达组则为(25.60±3.33)％.结论 TRIM21能抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,增强T淋巴细胞对Fas诱导细胞凋亡的敏感性.
关键词： T淋巴细胞凋亡 TRIM21 c-FLICE抑制蛋白
