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SYBR GreenI文献资料
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nklin大肠杆菌ompT基因的相对表达定量PCR方法的建立
目的 建立ompT基因表达水平解析的定量方法.方法 利用嵌合荧光(SYBR GreenI)标记,以编码甘油醛3-磷酸脱氢酶的看家基因gapA为内参基因,建立用于ompT基因表达水平解析的两步法实时定量反转录PCR.通过大肠杆菌的鸡体内感染模型,获取感染菌体,利用该定量PCR对感染菌体中ompT基因在感染鸡体内的表达水平进行了解析.结果 成功建立了ompT基因表达水平解析的定量PCR.定量PCR结果显示,相对于体外培养,APEC E058株ompT在鸡体内的表达上调了6.69倍.结论 建立的ompT基因定量PCR方法稳定、可靠,可用于ompT表达水平的解析.
关键词： SYBR GreenI 定量反转录PCR ompT 表达 -
人类Gfi1基因SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立测定人类Gfi1mRNA表达量的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,为进一步研究新基因的功能奠定基础.方法 以Gfi1基因为靶基因设计引物.构建携带GficDNA的质粒plox-Gfi1,经过纯化,质粒浓度测定,拷贝数的计算及10倍的梯度稀释制备标准品.应用ABI stepone PCR仪对Cfi1mRNA进行实时荧光定量PCR检测,建立标准曲线和熔解曲线.结果 建立了Cfi1mRNA表达的实时荧光定量PCR方法,本法线性范围为6.36×102～6.36×108copies/μl,线性相关系数y2为0.996,熔解曲线为单峰,Tm值为(89.98±0.22)℃,标准品的循环阈值批内变异系数和批间变异系数分别为1.35%～3.61%和1.49%～3.42%.结论 本研究建立的Gfi1mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性及稳定性好,可用于Gfi1基因的定量检测.
关键词： Cfi1 SYBR GreenI 实时荧光定量PCR
