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重叠延伸PCR法文献资料
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用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体
目的:以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡmolecule transactiva-tor,CⅡTA)突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法.方法:首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段,再将两片段混合,在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸,然后再加入引物进行目的片段指数扩增,将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES.结果:成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体.结论:优化后的重叠延伸PCR法(OE-PCR)克服了传统方法的诸多弊端,非常适合于构建中间缺失突变体,值得推广.
关键词： 重叠延伸PCR法 中间缺失突变体 MHCⅡ类分子反式激活因子
