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克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物
目的:用同源引物克隆RNA低丰度表达的小鼠β-趋化因子受体.方法:将β-趋化因子受体小鼠MIP-1αR,人MCP-1R和大鼠IL-8R跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后,设计出同源引物,再用RT-PCR扩增出DNA片段,经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物,用Marathon PCR扩增出该新基因.结果:成功克隆出小鼠β-趋化因子受体5(CCR5) cDNA全基因序列,序列全长2 888 bp,开放阅读框1 065个核苷酸,编码355个氨基酸.该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员.结论:该克隆策略的引物设计思路较为新颖,能有效捕获超基因家族中的新基因.该克隆方法敏感、高效,对基因家族新基因的克隆具有广泛的意义.
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氧化鲨烯环化酶(OSC)基因家族研究进展
氧化鲨烯环化酶(OSC)是一个超基因家族,可催化2,3-氧化鲨烯环化生成甾醇和三萜类前体物质,是三萜类前体物质和甾醇生成的关键酶.随着现代生物技术的不断发展.越来越多的OSC基因被分离和克隆并进行功能验证以及生物信息学分析.虽然研究者们已经对OSC的研究已取得了一定的进展,但其催化的下游的反应机理尚不清楚.本文对OSC基因家族的研究现状、其所参与的生物合成代谢途径、OSC基因的结构特征和表达调控、定点突变研究和分子进化研究等进行了简要阐述.