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碳酸酐酶Ⅱ基因克隆及在毕赤酵母中的异源表达
碳酸酐酶Ⅱ(carbonic anhydrase Ⅱ, CA Ⅱ)是参与机体多种代谢活动和病理活动的一种重要催化酶。通过基因重组、电转化等方式,得到能异源高表达人 CA Ⅱ的毕赤酵母(Pichia. pastoris)GS115工程菌。对工程菌进行培养及甲醇诱导后,经离子交换层析柱分离纯化后得到较纯的重组 CA Ⅱ。通过 Western blotting、酶活力及圆二色谱检测发现重组和商品化 CA Ⅱ具有相似的酶活力和构象,为 CA Ⅱ今后进一步在临床的研究和工业应用打下了基础。
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木聚糖酶高产菌株Pichia pastoris G12摇瓶发酵工艺的优化
目的 研究甲醇诱导的Pichia pastorisG12在摇瓶发酵条件下产木聚糖酶的表达规律.方法 以木聚糖酶酶活力为评价指标,通过单因素试验和L9(34)正交试验考察确定摇瓶发酵条件下pH、接种时间、甲醇体积分数、诱导时间等因素对酶活力的影响.结果 各因素影响程度依次为pH>甲醇体积分数>诱导时间>接种时间,优表达条件为接种时间21 h,pH为5.5,甲醇诱导体积分数为1.50%,诱导时间为162 h.在此优条件下培养菌株酶活力可达395.124 U·mL-1.结论 该研究为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了依据.