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Klf10沉默抑制机械力诱导的人牙周膜细胞成骨向分化
目的:探讨Klf10沉默对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)受力后骨向分化的影响.方法:分离培养HPDLCs,RNA干扰沉默Klf10的表达,用离心加力法对细胞加载机械力,并予hedgehog信号通路特异性激动剂purmorphamine进行干预.采用ELISA法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组细胞Klf10 mRNA和蛋白表达水平,并检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA和蛋白的表达情况;利用Western免疫印迹法检测hedgehog信号转导通路成员胶质瘤相关癌基因同源物1(glioma-associated oncogene homolog 1,GLI1)和Ptch1 (patched-1)的蛋白表达.采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:机械力诱导6h后,Klf10、Runx2、OPN和OCN mRNA和蛋白的表达显著升高,ALP活性升高,GLI1和Ptch1蛋白表达升高(P＜0.05).与空白组相比,转染Klf10 siRNA组Klf10 mRNA和蛋白水平显著降低(P＜0.05).同时,Klf10 siRNA显著抑制ALP活性,下调Runx2、OPN和OCN mRNA和蛋白的表达,抑制GLI1和Ptch1蛋白表达(P＜0.05).Purmorphamine显著抑制Klf10 siRNA沉默介导的成骨分化效应(P＜0.05).结论:Klf10沉默可以抑制机械力作用下HPDLCs的骨向分化,可能与调节hedgehog信号转导通路有关.
