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  • 敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛次要组分FimCDE的载体构建

    作者:黎景景;高鑫;李宽钰;王文梅

    目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE.构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础.方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含有人工设计的酶切位点的fimC基因的上游片段及fimE的下游片段,将其克隆到自杀质粒pPHU281内,命名为pPHU281-C-E;再将抗大观霉素的抗性基因插入到C及E片段之间,终获得重组质粒pPHU281-C-Spec-E.结果:酶切及DNA序列分析验证重组质粒pPHU281-C-Spec-E构建成功.结论:成功构建了含有牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分基因fimC上游及fimE下游片段的重组质粒pPHU281-C-Spec-E,可用于构建菌毛蛋白次要组分FimCDE缺陷的的突变体.

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