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两种方法建立的人肝癌细胞多药耐药模型的比较
目的比较药物大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立的人肝癌多药耐药模型的生物学特性.方法分别采用药物大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立人肝癌阿霉素(adriamycin,ADM)多药耐药细胞亚系HepG2/ADMs和HepG2/ADMi.MTT法检测两种细胞对多种化疗药的敏感性,细胞计数法绘制生长曲线并用公式法计算倍增时间,流式细胞术检测细胞周期以及细胞对药物的摄入和外排.并将细胞接种于裸鼠,观察成瘤率及瘤体大小.结果以含1μg/mL ADM的培养液进行筛选,3个月共筛选4次,所得细胞亚系命名为HepG2/ADMs,其对ADM的耐药指数为30.5.浓度梯度递增法诱导3个月后,细胞可以在含0.4 μg/mL ADM的培养液中正常生长增殖,对ADM的耐药指数为51,将该细胞亚系命名为HepG2/AD-Mi;MTT法检测显示,两种细胞系不仅对ADM耐药,而且对其它化疗药也有抗性,呈现多药耐药特性,但HepG2/ADMs对药物的敏感性普遍高于HepG2/ADMi.与HepG2/ADMi相比,HepG2/ADMs的倍增时间相对较短,G0/G1期细胞相对较少,G2/M期细胞相对较多,细胞对ADM的摄入较多,外排较少,表现为药物的滞留率较高.动物实验发现HepG2/ADMs的成瘤率明显高于HepG2/ADMi(90%vs 3.33%),且肿瘤生长速度较快,体积较大.结论药物大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立的多药耐药模型有很大差异,前者更接近临床耐药现象.
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人肝癌原发性耐药细胞亚系的建立及耐药机制的初步探讨
目的从人肝癌细胞系HeFG2中筛选出原发性耐药株,建立相应的细胞亚系并探讨其耐药机制.方法采用阿霉素(adriamycin,ADM)大剂量冲击法筛选原发性耐药细胞株,倒置显微镜下观察其形态学变化,细胞计数法绘制生长曲线,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞周期和检测耐药蛋白的表达.结果随冲击次数的增加,筛选出细胞的耐药指数(resistance index, RI)逐渐升高,筛选3次后对ADM的RI可达30.5;其形态学特点、生长特性及细胞周期分布与亲本细胞有明显差异,同时发现耐药蛋白P-gp、MRPt LRP表达增强.结论肝癌细胞系HepG2是个非均质的群体,其中存在着原发性耐药细胞株.
