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miRNA-24通过靶向CARMA3基因调控胃癌AGS细胞的增殖和凋亡
目的:探讨miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(AGS、MKN74、HGC27)和胃黏膜上皮GES-1细胞中miRNA-24的表达水平.建立miRNA-24过表达的AGS细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关cyclinD1、CDK2、Bcl-2、p-IκB-α/IκB-α和p-Rb/Rb蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miRNA-24可能的靶基因.结果:3株胃癌细胞中miRNA-24的表达均低于GES-1 cell.转染miRNA-24 mimic(miR-24组)48 h后AGS细胞增殖活力显著低于miR-NC组[(119.62±12.63)％ vs(147.79± 11.89)％,P＜0.05],并出现周期阻滞,且早期和晚期细胞凋亡率明显较miR-NC组上升[早期凋亡率:(11.32±2.27)％ vs (0.57±0.08)％;晚期凋亡率:(15.56±2.27)％ vs (0.85±0.16)％,均P＜0.05].转染miR-NA-24 mimic后,细胞中cyclinD1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白表达水平均较miR-NC组显著降低,p-IκB-α蛋白的表达水平较miR-NC组显著上升.共转染miRNA-24 mimic和miRNA-24可能作用靶点CARMA3基因过表达质粒的miR-24+pcDNA-CAR-MA3组AGS细胞CARMA3蛋白表达较miR-24组明显增加(1.74±0.09 vs 1.03±0.06,P＜0.05).miR-24+pcDNA3-CARMA3组AGS细胞48 h增殖活力较miR-24组显著升高[(137.85±15.34)％ vs(102.31±11.23)％,P＜0.05];而miR-24+pcDNA3-CARMA3组AGS细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较miR-24组显著降低[早期凋亡率:(4.24±0.56)％ vs(11.32±2.27)％,P＜0.05;晚期凋亡率:(6.38±0.63)％ vs(15.56±2.27)％,P＜0.05].CARMA3过表达可部分逆转miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的作用.结论:miRNA-24可通过靶向CARMA3基因抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡.
