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羧肽酶类文献资料
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基因芯片法检测胆囊胆固醇结石病人肝脏羧肽酶E的表达
目的:利用基因芯片和实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)分析胆囊胆固醇结石病人肝脏中羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)的mRNA表达,探讨CPE与胆囊胆固醇结石形成可能相关的分子机制.方法:检测病人的血清总胆固醇、三酰甘油以及胆石、胆汁成分测定.正常肝细胞株(HL-7702)为共同参照,用含10 000个cDNA克隆的芯片对8份肝脏标本样品(包括6例胆囊结石和2例无胆囊结石对照)进行基因表达谱对比分析;通过实时PCR验证阳性结果.结果:有效表达基因6 068个,与正常对照组比较,胆固醇结石病人的肝脏有67条差异表达基因,其中CPE基因呈下调表达,经实时PCR验证与芯片筛选结果一致.进一步比较另12例胆固醇结石病人和8例对照组的肝脏组织CPE表达,CPE在胆囊胆固醇结石病人肝脏中的表达也显著低于对照组(39.52±6.21比124.50±36.36,P＜0.05).结论:肝脏CPE表达下降可能与胆囊胆固醇结石的形成有关.
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γ-seminoprotein单链抗体/突变型人羧肽酶A融合基因的构建
目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因后进行了定点突变,并将突变型人羧肽酶A基因与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合. 方法应用重叠延伸法将突变型人羧肽酶A与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合,并在大肠杆菌中进行表达. 结果序列分析表明:我们得到大约为1980 bp的基因,其5端为抗精浆蛋白单链抗体基因,3端为人羧肽酶A突变体基因,抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶A基因成功地融合为一条基因,应用pGEX-4T-1表达载体原核表达得到一Mr约为97 000的特异蛋白. 结论抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶A基因成功的融合为一条基因并进行了原核表达.
