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TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ2 mRNA表达及脂联素分泌的影响
用肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别处理未分化、已分化的3T3-L1细胞,检测培养细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPAR-γ2)mRNA的表达和脂联素的分泌.结果表明TNF-α可明显抑制3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γ2 mRNA表达和脂联素的分泌(P＜0.05或P＜0.01),提示TNF-α可能通过PPAR-γ影响脂联素的分泌.
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人β3-AR和PPAR-γ2基因真核表达载体及β3-AR稳定表达细胞株的构建
目的 构建高效表达人β3-肾上腺素受体(hβ3-AR)的真核细胞表达载体,为进一步研究hβ3-AR的功能以及与过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2 (PPAR-γ2)调控基因之间的相互影响奠定基础.方法 从人肾旁脂肪组织提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增hPPAR-γ2、hβ3-AR cDNA全长序列.将EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后的hβ3-AR cDNA与同样进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA 3.1(+)载体连接形成重组载体pcDNA 3.1(+)/hβ3-AR.将XbaⅠ和AflⅡ双酶切后的hPPAR-γ2 cDNA与同样进行XbaⅠ和AflⅡ双酶切的pcDNA 3.1(+)载体连接形成重组载体pcDNA 3.1(+)/hPPAR-γ2.通过限制性内切酶酶切鉴定后对DNA序列进行测序,鉴定重组质粒中hβ3-AR和hPPAR-γ2基因的完整性和可靠性.运用定点诱变方法,对野生型hPPAR-γ2和hβ3-AR质粒进行定点诱变,构建Pro12Ala突变的hPPAR-γ2和Trp64Arg突变的hβ3-AR的pcDNA 3.1(+)载体,电穿孔法将人hβ3-AR重组表达载体pcDNA 3.1(+)/hβ3-AR(突变型和野生型) 转染到SH-SY5Y细胞中,用G418筛选获取稳定转染细胞株,并用RT-PCR、Western blot方法进行鉴定.结果 酶切和测序分析显示重组质粒构建正确,并在转染的SH-SY5Y细胞中获得hβ3-AR的高效表达.结论 成功克隆了人PPAR-γ2、β3-AR基因全长cDNA,并成功构建了人野生型和突变型的hPPAR-γ2和hβ3-AR的真核表达重组体[pcDNA 3.1(+)/hPPAR-γ2和pcDNA 3.1(+)/hβ3-AR].成功获得了稳定表达hβ3-AR基因的SH-SY5Y细胞株.
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2型糖尿病大鼠肌肉组织中PPAR-γ2基因的表达研究
目的 观察2型糖尿病大鼠肌肉组织中过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPAR-γ2)的表达,探讨2型糖尿病的病变机制.方法 SD大鼠随机分为正常对照组和模型组,各10只.模型组高脂饲料喂养2个月后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg·kg-1)复制糖尿病模型,采用RT-PCR方法,检测造模后6周肌肉组织PPAR-γ2 mRNA的表达.结果 造模后6周,糖尿病模型组大鼠肌肉组织PPAR-γ2 mRNA的表达明显低于正常对照组(P＜0.01).结论 2型糖尿病伴有大鼠肌肉组织PPAR-γ2的表达水平下降.
